Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Кропотов, Андрей Владимирович
03.00.25
Кандидатская
1999
Санкт-Петербург
125 с. : ил.
Стоимость:
499 руб.
ОГЛАВЛЕНИЕ
I. ВВЕДЕНИЕ
II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
§1 Структура и функции ретропозонов Alu-семейства
§2 Регуляция транскрипции генов 3-го класса
§3 Регуляция транскрипции Alu-повторов
III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
§1. Линии клеток, использованные в работе
§2. Получение ядерной и цитоплазматической фракций
культивируемых клеток
§3. Мечение проб для гель-шифт экспериментов
§4. Гель-шифт эксперименты
§5. Определение равновесной константы ДНК-связывания
для комплексов С2 и СВ
§6. Транскрипция in vitro
§7. Отбор DB31 клона из экспрессионной клонотеки HeLa в
векторе A,gt11
§8. Секвенирование ДНК
§9. Экспрессия рекомбинантного белка ACR1 (rACR1)
в E.coli
§10. Получение и очистка антител на ACR1
§11. Электрофорез и иммуноблоттинг
§12. Иммунофлуоресцентное окрашивание клеток
§13. Определение пероксидазной активности ACR1
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ
Часть1. Анализ взаимодействия ядерных белков
человека с промотором ретропозонов Alu-семейства
§1 Участок Alu-повторов, покрывающий В-бокси последовательность, расположенную в З'-направлении от него (BDB-регион), взаимодействует с несколькими
ядерными белками сиквенс-специфическим образом
§2 Белок, формирующий комплекс СЗ, с большей аффинностью связывается с олигонуклеотидами, представляющими BDB-регионы наименее
транскрипционно-активных подсемейств Alu-ретропозонов
§3 Один из комплексов (комплекс С2), между человеческими ядерными белками и Alu-BDB-пробами, формируется В-бокс
связывающим белком
§4 Формирование некоторых из гель-шифт комплексов, между ядерными белками человека и промотором Alu-повторов, подавляется в клетках, инфицированных аденовирусом или
экспрессирующих аденовирусный Е1А-ген
§5 Комплекс С2 формируется белком, отличным от TFIIIC2
§6 Белок, формирующий гель-шифт комплекс С2 с Alu-BDB-олигонуклеотидом, взаимодействует с В-боксом аденовирусного
VAI-гена с той же афинностью, что и с В-боксом Alu-повторов
§7 Белки HMG1/2 взаимодействует с BDB-регионом
Alu-повторов
§8 Формирование одного из комплексов (СЗ), образуемых ядерными белками человека с Alu-BDB-последовательностью,
стимулируется при добавлении экзогенных белков HMG1/2
§9 Последовательность, расположенная правее В-бокса промотора Alu-повторов (DB-регион), связывается с
негативными факторами РПЗ-зависимой транскрипции, а последовательность, расположенная левее (UB-регион) с
позитивными факторами
Часть 2. Клонирование и исследование свойств вероятного
репрессора РПЗ-зависимой транскрипции Alu-повторов
§1 Отбор и секвенирование кДНК-клона , кодирующего белок,
который связывается с DB-регионом Alu-повторов
§2 Компьютерный анализ белковой последовательности
§3 Экспрессия ACR1 в E.coli и его очистка
§4 rACR1 связывается с BDB-регионом Alu-повторов in vitro
§5 rACR1 имеет пероксидазную активность
§6 Определение клеточной локализации ACR1
§7 Рекомбинантный ACR1 специфически репрессирует РПЗ-зависимую транскрипцию Alu-повторов in vitro
V. ОБСУЖДЕНИЕ И ВЫВОДЫ
VI. СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Таким образом транскрипция генов третьего класса регулируется на нескольких уровнях, включая изменение активности базальных и небазальных транскрипционных факторов, метилирование ДНК и влияние белков хроматина.
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Изучение ядерных протеогликанов клеток печени мышей | Григорьева, Эльвира Витальевна | 1998 |
Морфологическая характеристика реактивных изменений в незавершившем морфогенез миокарде имматуронатных и матуронатных птиц | Двадненко, Константин Владимирович | 2004 |
Получение и некоторые свойства искусственной эндоцитобиотической ассоциации амеб и хлорелл | Карпов, Александр Семенович | 1998 |