Изучение ядерных протеогликанов клеток печени мышей

• Автор: Григорьева, Эльвира Витальевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 122 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2Л Общие сведения о протеогликанах
2.2 Структура и классификация гликозаминогликанов
2.2.1 Структурная гетерогенность гликозаминогликанов
2.2.2 Модификационные возможности гликозаминогликанов
2.3 Структура протеогликанов
2.3.1 Классификация протеогликанов
2.3.2 Организация молекул протеогликанов
2.3.3 Гликозилированные и белковые формы функционально активных протеогликанов
2.3.4 Протеогликан и белок как альтернативные продукты одного гена
2.4 Локализация протеогликанов и их функции
2.4.1 Протеогликаны внеклеточного матрикса
2.4.2 Протеогликаны плазматических мембран
2.4.3 Внутриклеточные протеогликаны
2.4.4 Ядерные протеогликаны
2.5 Биологические функции протеогликанов
2.6 Протеогликаны нормальных и трансформированных клеток
2.6.1 Изменение степени сульфатирования гликозаминогликанов
2.6.2 Изменения состава протеогликанов в клетках с различным пролиферативным статусом
2.7 Антимитотическая активность протеогликанов
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1 Реактивы
3.2 Материалы
3.3 Методы
3.3.1 Выделение ядер
3.3.2 Очистка ядер от цитоскелетных филаментов
3.3.3 Удаление ядерных мембран
3.3.4 Фракционирование ядер
3.3.5 Выделение протеогликанов
3.3.6 Ионообменная хроматография интактных препаратов протеогликанов
3.3.7 Экстракция липидов органическими растворителями
3.3.8 Аналитический электрофорез в агарозном геле
3.3.9 Обработка азотистой кислотой
3.3.10 Обработка ферментами
3.3.11 Электрофорез коровых белков в полиакриламидном геле
3.3.12 Аналитические методы
3.3.13 Гель-фильтрация очищенных препаратов протеогликанов
3.3.14 Хроматографическое определение длины РНК
3.3.15 Определение состава выделенной РНК методом тонкослойной хроматографии
4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1 Выделение протеогликанов из клеточных ядер
4.2 Определение состава ядерных гликозаминогликанов клеток печени мышей
4.3 Доказательство ядерного происхождения выделенных протеогликанов ;
4.3.1 Спектр ядерных гликозаминогликанов до и после очистки ядер от цитоскелетных филаментов
4.3.2 Сравнительный анализ состава гликозаминогликанов из различных клеточных субфракций
4.4 Связь гликозаминогликанов с коровым белком в ядрах клеток
4.5 Локализация протеогликанов в клеточном ядре
4.6 Изучение состава ядерных протеогликанов в трансформированных клетках печени мышей
4.6.1 Определение состава ядерных протеогликанов опухолевых клеток
4.6.2 Сравнительный анализ состава протеогликанов из ядер нормальных и трансформированных клеток печени мышей
4.7 Биохимические особенности ядерных протеогликанов
4.7.1 Образование протеогликанами макромолекулярных агрегатов с РНК
4.7.2 Хроматографический анализ интактного препарата ядерных протеогликанов

4.8 Исследование РНК, присутствующей в интактном препарате
ядерных протеогликанов
4.8.1 Определение длины РНК
4.8.2 Определение нуклеотидного состава олигоРНК
5. ОБСУЖДЕНИЕ
6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
7. ВЫВОДЫ
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

К тому же следует отметить, что изменение степени сульфатирования является наиболее динамичной модификацией гликозаминогликанов и может служить первой ответной реакцией клетки на возможные регулирующие сигналы на уровне протеогликанов.
2.6.2 Изменения состава протеогликанов в клетках с различным пролиферативным статусом
При целенаправленной трансформации клетки каким-либо специфическим воздействием, наряду с изменением степени сульфатирования существующих молекул протеогликанов, включаются более долговременные механизмы клеточной адаптации. При этом естественные различия в составе протеогликанов, присущие различным нормальным клеткам, могут сглаживаться и клетки принимают некое сходство друг с другом. Например, различия гликозаминогликанов нормальных фибро- и хондробластов исчезают при трансформации вирусом саркомы Рауса (Rous sarcoma virus), клетки начинают работать по общей биосинтетической программе для ГАГ, и это обратимо (Shanley et al.,1983). Это качественный переход и связан он с постепенным исчезновением одного класса протеогликанов и заменой его на другой.
2.6.2.1 Замена дерматансульфата на хондроитинсульфат как показатель злокачественной трансформации
Наиболее принципиальным моментом, касающимся состава протеогликанов трансформированных клеток, является постепенное замещение дерматан-сульфата(ДС) на его не полностью модифицированный предшественник хондроитинсульфат А и/или С (ХС А/С). В отличие от нормальных клеток, в которых большинство ДС связано с клеточной фракцией и не удаляется обработкой трипсином, в опухолевых клетках ХС А в основном локализован на поверхности клеток и почти полностью снимается быстрой обработкой трипсином (Dietrich, Armelin, 1978).