Образование хитин-глюканового комплекса в процессе онтогенеза Aspergillus nigir V. Nieghem

• Автор: Немцев, Дмитрий Викторович
• Шифр специальности: 03.00.24
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 94 с. : ил.

Оглавление
Введение
Глава I. Обзор литературы
1 Структурные полисахариды клеточной стенки грибов
1.1. Строение и состав клеточной стенки мицелиальных грибов
1.2. Хитин грибов: биосинтез и основные отличия в физико-химических свойствах от хитина ракообразных
1.3. Хитозан грибов
1.4. Глюканы грибов
1.5. Хитин- и хитозанглюкановые комплексы грибов
1.6. Использование хитина, хитозана, хитозанглюканового комплекса
и глюканов в практике
2. Изменения в составе липидов в процессе онтогенеза мицелиальных грибов
2.1. Состав липидов грибов: отличия и сходства с прокариотами и высшими эукариотами
2.2. Изменение в составе липидов грибов в процессе их роста и онтогенеза
2.2.1.Изменения в составе липидов в процессе прорастания спор
2.2.2. Изменения в составе липидов в процессе роста мицелия и
при переходе мицелиальной формы в дрожжевую
3. Изменения в углеводном составе цитозоля клеток грибов в
процессе онтогенеза
Экспериментальная часть <
Глава II. Материалы и методы исследования
1. Объекты исследования
2. Методы культивирования микроорганизмов
3. Методы исследования
3.1. Методы электронной микроскопии
3.2. Биохимические методы анализа
3.2.1. Исследование липидного состава грибов
3.2.2. Определение углеводного состава цитозоля клеток грибов
3.2.3. Получение ХГК и анализ его химического состава
Глава III. Результаты исследования и их обсуждение
1. Получение из мицелиальных грибов полисахаридных комплексов и определение степени их деацетилирования
1.1. Изучение морфологии поверхности мицелия А. тдег и строение его клеточной стенки
1.2. Разработка метода получения ХГК из биомассы А. тдег, полученной целевым назначением
1.3. Разработка метода определения степени деацетилирования полиаминосахаридных комплексов
1.3.1. Условия гидролиза ХГК
1.3.2. Определение ацетата в гидролизатах ХГК методом ГЖХ
1.3.3. Определение содержания Ы-глюкозамина
1.3.4.Определение степени деацетилирования ХГК
2. Изменения в содержании хитина и глюкана в ХГК в зависимости от состава питательных сред
3. Образование ХГК и изменения в углеводном и липидном
составе клеток А. тдег в процессе онтогенеза
3. 1. Прорастание конидий и факторы, влияющие на этот процесс
3.2. Изменения в составе опорных полисахаридов КС и углеводов цитозоля мицелия в динамике роста А.тдег
3.3. Изменения в углеводном составе цитозоля клеток в I и II фазе спорогенеза в связи с образованием ХГК
3.4. Углеводный состав цитозоля зрелых спор в связи с образованием ХГК
3.5. Состав липидов клеток А. тдег в процессе онтогенеза в связи с образованием ХГК
3.5.1. Липидный состав спор А. тдег, находящихся в состоянии экзогенного покоя
3.5.2. Состав липидов мицелия А
3.6. Корреляции между образованием структурных полисахаридов КС и составом липидов клеток и углеводов цитозоля в процессе
онтогенеза А
4. Разработка способа получения ХГК из мицелия А. тдег, являющегося отходом при производстве лимонной кислоты
5. Обсуждение результатов исследований
ВЫВОДЫ
Список литературы

3. Методы исследования.
3.1. Методы электронной микроскопии.
Изучение поверхности мицелия проводили методом сканирующей микроскопии на приборе JEOL JSM-T300 (Япония). Образцы контрастировали в 2,5% глютаральдегида в 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,2) в течение 12 часов, затем обезвоживали последовательно в 30, 50,70,96 % этаноле и в ацетоне. Напыляли платиной и палладием.
Электронномикроскопические исследования проводили на приборе JEM-7. Материал фиксировали в течение 40 минут в 1,5% растворе КМп04, затем в 1% растворе Os04 в ацетат-вероналовом буфере (pH = 6.0-6.2) в течение 12-14 часов на холоде. Фиксированный материал заключали в агар и проводили обезвоживание в ряде растворов этанола возрастающей концентрации и в конце - абсолютным ацетоном. После обезвоживания агаровые блочки переносили в эпон (Бирюзова с соавт., 1963). Срезы делали на ультрамикротоме КВ-4800. Контрастирование проводили вначале 3% раствором уранилацетата, затем по методу Рейнольдса (Reynolds, 1963).
3.2. Биохимические методы анализа.
3.2.1. Исследование липидного состава грибов.
Легкоэкстрагируемые липиды выделяли из мицелия и спор A.niger методом Фольча (Folch et al., 1957) .Прочносвязанные липиды получали из материала , оставшегося после экстракции легкоэкстрагируемых липидов путем гидролиза в 1% (по объему) H2S04 в смеси хлороформ-метанол (2:1) в течение 3 часов (Peck , 1974). Для получения метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК) использовали 2 н HCI -метанольный реагент (Кейтс, 1975). Разделение МЭЖК проводили на газожидкостном хроматографе Хром-5 (ЧСФР) на колонке 2500 хЗ мм с 5% Silar -5СР на Хромосорбе W-HP (100-120 меш). Режим изменения t колонки программировали со скоростью 2 ° С/ мин. от 190°С до 240 °С, температура детектора - 250 °С , инжектора -230 °С , скорость газа носителя (гелия) 40 мл/мин. , детектор - пламенноионизационный , однократный объем пробы 2-3 мкл (0.002-0.003 мг смеси жирных кислот). В качестве стандарта МЭЖК использовали их смесь фирмы “Serva” (L-207) с добавлением МЭ линолевой и арахидоновой кислот