Получение и иммунохимическое исследование полимерной фракции столбнячного анатоксина

• Автор: Бинима Сагу
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 95 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Глава 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Краткая историческая справка
1.2. Особенности эпидемиологии столбняка
1.2.1. Состояние заболеваемости столбняком в странах Африки
1.3. Особенности профилактики столбняка
1.4. Столбнячный токсин
1.4.1. Получение нейротоксина, его характеристика и структура
1.4.2. Фрагментация ТС
1.4.3. Взаимодействие ТС с рецепторами и физиологическая
роль фрагментов ТС
1.4.4. Способ получения СА
1.5. Методы очистки С А
1.5.1. Характеристика метода мембранной диафильтрации для
очистки СА
1.5.2. Очистка С А с помощью гель-фильтрации
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы
2.1.1. ТС и СА
2.1.2. Сыворотки
2.1.3. Диагностикумы
2.1.4. Лабораторные животные
2.1.5. Буферные растворы, реагенты, хроматографические
носители
2.1.6. Оборудование

2.2 Методы
2.2.1. Диафильтрация
2.2.2. Спектрофотометрия
2.2.3. Хроматография
2.2.4. Определение белка
2.2.5. Иммунохимическая характеристика препаратов
2.2.6. Определение удельной антигенной активности препаратов
2.2.7. Определение иммунизирующей активности препаратов
2.2.8. Определение ревакцинаторного эффекта препаратов
2.2.9. Определение белкового азота
2.2.10 Приготовление эритроцитарных диагностикумов
2.2.11 Получение латексного диагностикума и контрольного ла
текса
2.2.12 Постановка реакции агглютинации латекса
2.2.13 Статистическая обработка результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБ
СУЖДЕНИЕ
3.1. Очистка СА с использованием ступенчатой диафильтра

3.1.1. Одноступенчатая диафильтрация С А
3.1.2. Двухступенчатая диафильтрация СА
3.1.3. Использование технологии мембранной "рехроматогра
фии"при производственной очистке СА
3.2. Исследование иммуногенной активности высокоочшцен
ной полимерной фракции СА
3.3 Выделение и очистка полимерной фракции СА методами
колоночной гель-хроматографии

3.4. Изучение сенситивных свойств молекулярно-однородных 72 фракций препарата СА
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

50, ВПУ-100 с соответствующими номинальными пределами разделения биополимеров в килодальтонах [1].
В 1993 году в результате работ по совершенствованию таких ультрафильтров появились новые модифицированные половолоконные модули ВПУ(МВ)-15М, ВПУ-50М и ВПУ-ЮОМ. В качестве модифицирующего (композиционного) слоя в них был использован природный полисахарид - декстран, который обладает высокой химической стойкостью, гидрофильностью и инертностью по отношению к белкам [1, 13].
Предварительные испытания, показали, что модифицированные диафильтры серии ВПУ-М имеют пониженную сорбционную активность поверхности, позволяют с большей скоростью и стабильностью разделять биополимеры и легко регенерируются [15].
При производстве очищенного концентрированного СА не редки случаи, когда итоговые серии не соответствуют требованиям ВОЗ по показателям специфической активности, которые составляют для столбнячного анатоксина - 1000 ЕС/мг белкового азота. В таких ситуациях рекомендуется прибегать к дополнительной очистке.
В 1974-1975 годах на предприятии "Биомед" им. И. И. Мечникова проводились исследования по применению метода диафильтрации для дополнительной очистки СА. Было показано что таким путем можно повысить удельную активность некондиционных серий до показателей, требуемых ВОЗ. Авторы запатентованного в то время способа располагали только плоскими мембранами типа 01аАо: ХМ-300, ХМ-100, РМ-30 и РМ-3, с соответствующими эксклюзионными пределами [16 ]. Однако, мембраны и установки этого типа, как известно, не обладают свойствами, необходимыми для ведения процессов диафильтрации в промыш-

ленных масштабах ( небольшая, порядка 150 см площадь фильтрации, явления концентрационной поляризации, малый объем диафильтраци-