Молекулярно-генетические аспекты в решении задач современного животноводства

• Автор: Зиновьева, Наталия Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Дубровицы
• Количество страниц: 241 с. : ил.

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА
На правах рукописи
ЗИНОВЬЕВА НАТАЛИЯ АНАТОЛЬЕВНА
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ В РЕШЕНИИ ЗАДАЧ СОВРЕМЕННОГО ЖИВОТНОВОДСТВА
Специальность 03.00.23 - БИОТЕХНОЛОГИЯ
ДИССЕРТАЦИЯ
на соискание ученой степени доктора биологических наук
Научные консультанты:
д. с.-х. н., академик РАСХН Л.К. Эрнст
д. в. н., профессор Г
Дубровицы

СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Трансгенные животные и возможности их использования в животноводстве
2.2. Молочная железа трансгенных животных как источник синтеза рекомбинантных белков
2.2.1. Принципы тканеспецифической экспрессии в молочной
железе трансгенных животных
2.2.1.1. Кислый сывороточный протеин
2.2.1.2. р-лактоглобулин
2.2.1.3. а-лактальбумин
2.2.1.4. р-казеин
2.2.1.5. аэ1-казеин
2.2.2. Возможности использования молочной железы трансгенных животных
2.2.2.1. Производство рекомбинантных белков
2.2.2.1.1. ЮМ человека
2.2.2.1.2. Химозин крупного рогатого скота
2.2.2.2. Изменение состава и свойств молока
2.2.3. Выбор вида трансгенных животных-продуцентов для
«генных ферм»
2.3. Диагностика пола предимплантационных эмбрионов крупного
рогатого скота

2.4. Анализ точковых мутаций у сельскохозяйственных животных
2.5. Заключение
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Реактивы и оборудование
3.2. Получение трансгенных животных
3.3. Анализ животных на трансгенность
3.4. Исследование экспрессии трансгенных мРНК
3.5. Исследование экспрессии трансгенных белков
3.6. Диагностика пола эмбрионов крупного рогатого скота
3.7. Анализ точковых мутаций у сельскохозяйственных животных
3.8. Статистическая обработка результатов
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. МвОБ как основа микроинъекционного буфера
4.1.1. Анализ физиологических показателей
4.1.2. Эффективность трансгенеза
4.2. Получение и анализ трансгенных животных
4.3. Анализ транскрипции у трансгенных животных
4.3.1. Молоко как источник РНК для анализа экспрессии у
трансгенных животных
4.3.2. Экспрессия мРНК ЮБ-1 человека у трансгенных кроликов
4.3.3. Экспрессия мРНК прохимозина крупного рогатого скота у трансгенных кроликов и овец
4.3.4. Анализ сплайсинга мРНК прохимозина в желудке крупного рогатого скота и в молочной железе трансгенных животных
4.4. Анализ синтеза рекомбинантных белков у трансгенных животных

экспрессия отмечалась в коже, почках и мышцах. Удлинение 5’ регуляторной области до 10,8 т.п.н. приводило к отсутствию неспецифической экспрессии, хотя, как следует заметить, уровень синтеза hSA в молоке был значительно ниже. Тестирование генной конструкции, содержащей кроме кДНК hSA интроны 1-6 под контролем промотора pLG длиной 3,0 или 5,5 т.п.н., выявило неспецифическую экспрессию, соответственно, в мышцах, почках, коже и мозговой ткани или в коже и почках. При использовании промотора pLG длиной 3,0 т.п.н. в сочетании с геном hSA, включающим различные интроны, неспецифическая экспрессия была установлена в коже, мышцах, почках, селезенке, мозге и слюнных железах (интроны 7-14) или только в мышцах и почках (интроны 1-14 и 2+7-14). На основании полученных данных авторами был сделан вывод об отсутствии в использованных генных конструкциях регуляторных элементов PLG, обеспечивающих специфическую для молочной железы экспрессию трансгена. Эти регуляторные элементы, по всей видимости, присутствуют в интронных последовательностях гена pLG и в 3’ регуляторной области.
Низкий уровень эктопной экспрессии pLG у части линий трансгенных мышей был отмечен при использовании конструкции, включающей 408 п.н. 5’ области гена pLG овец [109]. Bruce и Whitelaw [79] исследовали экспрессию pLG овцы в почках трансгенных мышей, полученных с различными генными конструкциями pLG. Так, при использовании промотора pLG длиной 408 п.н. все исследованные линии мышей экспрессировали трансген в молочной железе. Анализ мРНК в почках не выявил наличия эктопной экспрессии pLG. Укорочение промотора до 149 п.н. привело к тому, что только одна из семи линий трансгенных мышей синтезировала PLG в молочной железе. При анализе специфической мРНК в почках, как в экспрессирующей, так и в неэкспрессирующих линиях мышей