Анализ каллусной ткани Aconitum septentrionale Koelle : Физиологические и генетические аспекты

• Автор: Мигранова, Ирина Гайсаровна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 102 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Растения борца северного - перспективный источник дитерпеновых алкалоидов фармакологического назначения
1.1.1. Ботанико-морфологическая характеристика борца северного
1.1.2. Алкалоиды борца северного
1.2. Методы анализа межпопуляционного полиморфизма
1.3. Культивируемые in vitro клетки борца северного
дополнительный источник дитерпенового алкалоида лаппаконитина
1.3.1. Характеристика каллусной ткани
1.3.2. Генетическая обусловленность способности каллусных
тканей к длительному культивированию in vitro
1.3.3. Способность каллусных тканей к синтезу вторичных метаболитов
1.3.3.1. Влияние компонентов питательной среды на синтез вторичных метаболитов
1.3.3.2. Влияние условий культивирования на синтез вторичных метаболитов

1.3.3.3. Сомаклональная изменчивость в культуре in vitro
1.3.3.4. Индуцированный мутагенез в культуре клеток
1.3.3.5. Генетическая трансформация в культуре клеток
1.4. Применение метода полимеразной цепной реакции с использованием случайных праймеров для оценки генетической стабильности каллусных тканей
2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования
2.1.1. Получение и культивирование каллусной ткани
2.2. Определение содержания лаппаконитина в растениях
и каллусной ткани борца северного
2.3. Выделение ДНК
2.4. Амплификация ДНК методом полимеразной цепной реакции
2.5. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами
2.6. Электрофоретическое разделение ДНК в агарозном геле
2.7. Реактивы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Получение каллусной ткани борца северного
3.2. Анализ генетической гетерогенности популяций борца северного методом полимеразной цепной реакции с использованием случайных праймеров (RAPD-PCR)
3.3. Сравнительный анализ жизнеспособности каллусных тканей борца

северного, полученных из различных популяций
3.4. Характеристика каллусной ткани борца северного
3.5. Изучение степени стабильности генома борца северного
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.4. Применение метода полимеразной цепной реакции с использованием случайных праймеров для оценки генетической стабильности каллусных тканей.
Важным моментом при культивировании тканей in vitro является не только получение штаммов с заданными биосинтезирующими способностями, но и сохранение генетической стабильности полученного материала. Одним из наиболее удобных методов проверки генетической стабильности в настоящее время признана полимеразная цепная реакция.
Как отмечалось выше, специализированные клетки растений при введении в культуру in vitro переходят в дедифференцированное состояние, которое характеризуется, в частности, качественными и количественными изменениями в спектре образования как первичных, так и вторичных
метаболитов. Используя ранее применяемые методы, было практически
невозможно точно сказать какие из изменений произошли из-за
деспециализации клеток, а какие вследствие генетических мутаций. Кроме того, дальнейший отбор клеток с сомаклональными изменениями при
длительном культивировании in vitro осуществлялся главным образом по морфологическим и цитологическим признакам, что не являлось бесспорным доказательством закрепления полезного качества при регенерации растений. Полимеразная цепная реакция регистрирует изменения в первичной структуре ДНК, что позволяет определять характер изменения, произошедшего в культуре клеток. Так, Ю Н. Журавлев с коллегами, применяя метод RAPD-PCR, показал, что геном женьшеня претерпевает существенные изменения при переходе клеток к недифференцированному росту и при длительном культивировании in vitro [Козыренко и др., 1997]. Была определена сомаклональная изменчивость регенератов винограда, полученных из единичного протопласта [Schneider et al, 1996]. Протоклоны, затронутые обнаруженной мутацией обладали