Исследование цитокининов, продуцируемых ризосферными микроорганизмами

• Автор: Архипова, Татьяна Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 119 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Цитокинины
1.2. Некоторые аспекты практического применения цитокининов
1.3. Микроорганизмы, синтезирующие цитокинины
1.4. Микроорганизмы как агенты биологического метода борьбы с заболеваниями растений
1.5. Методы определения цитокининов
1.6. Методы анализа цитокининов, продуцируемых микроорганизмами
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Используемые в работе материалы и реактивы
2.2. Объекты и методы исследования
2.2.1. Объекты исследований
2.2.2. Приготовление конъюгатов цитокининов с белком
2.2.3. Получение антисыворотки к цитокининам
2.2.4. Твердофазный иммуноферментный анализ
2.2.4.1. Определение цитокининов
2.2.4.2. Определение ИУК и АБК
2.2.4.3. Определение неспецифического ингибитора иммунологи ческой реакции антиген-антитело в культуральной жидкости
2.2.5. Экстракционная очистка цитокининов
2.2.6. Ионообменная хроматография
2.2.7. Тонкослойная хроматография
2.2.8. Ультрафильтрация
2.2.9. Приготовление аффинного носителя
2.2.10. Иммуноаффинная хроматография
2.2.11. Высокоэффективная жидкостная хроматография в сочетании с масс-спектрометрией
2.2.12. Разделение свободных и связанных форм цитокининов
2.2.13. Определение молекулярного веса комплекса неспецифического ингибитора с цитокининами
2.2.14.УФ-спектрометрия
2.2.15. Биотест на цитокинины
2.2.16. Определение глюкозы
2.3.Статистическая обработка

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность. В процессе своей жизнедеятельности растения входят в сложные взаимоотношения с микроорганизмами, населяющими почву (Звягинцев и др., 1993). Микроорганизмы, окружающие растение в естественных условиях обитания, могут оказывать влияние на их рост и развитие. Предполагается, что одним из факторов воздействия является способность некоторых бактерий и грибов продуцировать гормоны растений (Мишке, 1988). Однако до сих пор остается неясным, в какой мере гормоны, продуцируемые микроорганизмами, влияют на физиологические процессы растений. Более ясное понимание характера влияния на растения гормонов, синтезируемых микроорганизмами, могло бы способствовать разработке эффективных рост-регулирующих препаратов как на основе самих гормон-продуцирующих микроорганизмов, так и синтезируемых ими гормонов. В настоящее время исследования по микробной продукции гормонов сфокусировались преимущественно на микроорганизмах, которые являются патогенами высших растений или входят с ними в симбиоз (Green, 1980), причем последним уделялось гораздо меньше внимания. В лаборатории прикладной микробиологии Института биологии УНЦ РАН было показано, что предпосевная обработка семян препаратом из микроорганизмов, отобранных по их способности подавлять рост патогенных для растений грибов, не только повышает устойчивость растений к грибным болезням, но и вызывает ряд эффектов, которые указывают на возможную продукцию данными микроорганизмами гормонов. Биотестирование, проведенное в лаборатории прикладной микробиологии, давало основание предполагать, что этими гормонами могли быть цитоки-нины, что не было до конца установлено. Проблема исследования продукции фитогормонов микроорганизмами, их влияния на рост и развитие растений в первую очередь связана со сложностью достоверного определения регуляторов роста растений. Применение антител к гормонам с целью увеличения селективности детекции и высокая чувствительность иммуноанализа может по-

(Taller, Wong, 1989), гельфильтрацию (Scarbrough et al., 1973; Taller, Wong, 1989; Stubervand, Taller, 1989). После выделения и очистки цитокининов из биологического материала проводят химическую идентификацию и биологическую оценку с помощью биотестов. Следует заметить, что проведение биотестов - необходимая процедура при работе с микробными цитокининами.
В настоящее время для химической идентификации цитокининов пользуются хроматографическими и спектрометрическими методами. В качестве хроматографических применяются методы ионообменной (Zikkmanis, 1975; Taller, Wong, 1989), препаративной и аналитической хроматографии в тонком слое (Taller, Wong, 1989), газовой, жидкостной хроматографии высокого давления (Akiyoshy et al., 1987; Ivanova et al., 1992; Jamerson et al., 1992). Среди спектрометрических методов нашли применение методы УФ-спектрометрии (Зикманис, 1973) и масс-спектроскопии. Некоторые авторы использовали иммуноферментный (Ivanova et al., 1992; Taller, Wong, 1989) и радиоиммунный (McDonald, Morris, 1981; Akiyoshy et al., 1987; Jamerson et al., 1992) методы.