Фенольные соединения каллусной ткани солодки голой и регуляция их биосинтеза

• Автор: Валиева, Райля Далифовна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 116 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение
1. Обзор литературы
1.1. Культура изолированных клеток и тканей
растений - продуцент веществ вторичного метаболизма
1. 2. Солодка - источник биологически активных веществ in vivo и in vitro
1.3. Физические и физиологические факторы регуляции процесса биосинтеза фенольных соединений в культуре in vitro
1.3. 1. Свет
1.3.2. Регуляторы роста
1.3.3. Минеральные элементы
1. 3.4. Другие факторы физиологической регуляции
вторичного метаболизма г.*:
1.4. Генетическая регуляция вторичного метаболизма
1.4. 1. Сомаклональная изменчивость
1. 4. 2. Клеточная селекция
1.5. Антибиотическая активность фенольных соединений
2. Объект и методы исследований
2. 1. Объект исследований
2. 2. Получение и условия культивирования каллусной ткани
2. 3. Условия стерилизации
2. 4. Методы исследований
2. 4. 1. Определение прироста сырой биомассы
2. 4. 2. Определение сухого веса каллуса
2. 4. 3. Определение суммарного содержания фенольных соединений
2. 4. 3. 1. Спектрофотометрический метод

2. 4. 3. 2. Хроматографический метод
2. 4. 4. Определение фунгицидной активности
экстрактов каллусов
2. 4. 5. Статистическая обработка данных
2. 4. 6. Использованные реактивы
3. Результаты исследований и их обсуждение
3.1. Получение линий каллусной ткани
3. 2. Анализ зависимости прироста сырой биомассы каллусов и
накопление в них фенольных соединений
3.3. Регуляция образования фенольных соединений в каллусной ткани солодки голой
3.3. 1. Синтез полифенолов и регуляторы роста
3.3.2. Связь между скоростью роста каллусной ткани и содержанием
фенольных соединений
3.3.3. Зависимость накопления фенольных соединений
от консистенции каллусной ткани
3.3.4. Действие света и концентраций азота и фосфора в среде на
биосинтез полифенолов
3.3.5. Влияние длительного культивирования каллусных
тканей на содержание фенольных соединений
3. 4. Фунгицидная активность экстрактов каллусных тканей
Заключение
Выводы
Список литературы
Приложения

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы
Солодковый корень является общепризнанным источником лечебных средств медицины многих народов мира. Экстракты корней солодки обладают антибиотическими, противовирусными и антиоксидантными свойствами, однако, их фунгицидная активность мало изучена. Из корней солодки изготавливаются различные препараты, обладающие отхаркивающим, противоязвенным, противовоспалительным, антисептическим и другими свойствами (Машковский, 1993). Это обусловлено присутствием в ее составе комплекса биологически активных веществ, число которых доходит до 48. Из них значительная часть приходится на тритерпеновые сапонины и фенольные соединения - флавоноиды и изофлавоноиды (Аммосов, Литвиненко, 1995).
Корни лакрицы всегда имели большой спрос как на внутреннем, так и на внешнем рынке. Экспорт сырья из этого растения в отдельные годы достигал 30 тыс. тонн. Однако в результате длительной эксплуатации естественные запасы солодки в настоящее время заметно сократились. В местах интенсивной заготовки сырья резко уменьшилось содержание глицир-ризиновой кислоты в корнях (Худайбергенов, 1990). Поэтому в настоящее время разрабатываются технологии семенного, вегетативного и микрокло-нального размножения. Особый интерес представляет использование метода культуры клеток и тканей для разработки экономически оправданных технологий промышленного производства продуктов из солодки. Основанием для таких разработок являются особенности культивируемых клеток растений, выражающиеся в их способности синтезировать соединения, характерные для целого растения или совершенно новые вещества, которые не образуются в интактном растении, а также биотрансформировать дешевые предшественники биосинтеза в ценный конечный продукт (Бутенко,
1986). Однако, как правило, в каллусных и суспензионных культурах про-

рованный мутагенез, получая при этом биохимические мутанты (Шамина и др., 1994). Величина индукции биохимических мутантов на 1-2 порядка превышает уровень спонтанных генетических изменений (Каранова, 1997). Их появление, по мнению Р. Г. Бутенко (1986), возможно связано с изменением как структурных, так и регуляторных генов.
Метод получения биохимических мутантов, широко распространенный у микроорганизмов и животных, в последние годы начинает применяться и в культуре растительных клеток. Так, после обработки культуры клеток диоскореи дельтовидной мутагеном Ы-нитрозо-К-метилмочевиной (74-НММ) был выделен штамм, синтезирующий диосгенин в 4 - 6 раз больше, чем исходные клетки (Каранова и др., 1986). Среди клонов, полученных после обработки культивируемых клеток стефании гладкой мутагеном Ы-НММ, были отобраны клоны с двухкратным увеличением продуктивности (Шамина и др., 1994). При сравнении спонтанно возникших и индуцированных 14-НММ клонов в культуре клеток АШа§1 Иг£Ы80гит оказалось, что наиболее продуктивными были индуцированные клоны (Сапко, Шамина, 1993).
Трансформация растительных клеток - перспективный метод получения штаммов культивируемых клеток с высоким содержанием вторичных соединений. Суть метода заключается в том, что при контакте агробактерий с растительными клетками происходит трансформация последних т. е. часть плазмидной ДНК агробактерии переходит в геном растительной клетки (Булгаков, Журавлев, 1992). П-плазмиды Agrobacterium Щпашепэ в основном влияют на функцию гормонообразования растений, в результате чего появляются так называемые опухоли корончатых галлов, которые обычно не обладают способностью к сверхсинтезу нужных соединений. Трансформация растительных клеток Ш-плазмидами Agrobacterium rhizogenes приводит к формированию “бородатых корней”,