Механизмы устойчивости сверхчувствительных растений табака к вирусу табачной мозаики

• Автор: Малиновский, Владимир Иванович
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 356 с. : ил.

Содержание
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Общая характеристика растений по их устойчивости
к вирусам
1.1.1. Чувствительные растения
1.1.2. Толерантные растения
1.1.3. Иммунные растения
1.1.4. Сверхчувствительные растения
1.2. Проникновение вирусов в растения
1.3. Накопление вирусов в чувствительных и сверхчувствительных растениях
1.4. Распространение вирусов по растению
1.5. Некротизация клеток сверхчувствительных растений
1.6. Приобретенная устойчивость сверхчувствительных растений к повторному заражению вирусами
Глава 2. Материалы и методы исследований
2.1. Растения
2.2. Вирус
2.2.1. Исходный материал
2.2.2. Очищенные препараты вируса
2.2.3. Меченые препараты вируса
2.3. Заражение растений
2.4. Определение инфекционности проб
2.5. Определение вирус-ингибирующей активности проб
2.6. Выявление крахмальных и тепловых некрозов
2.7. Инфильтрация листьев и получение
межклеточной жидкости
2.8. Приготовление препаратов для электронной микроскопии
2.9. Изолированные протопласты и клетки
2.9.1. Получение и заражение изолированных протопластов
2.9.2. Получение изолированных клеток
2.9.3. Определение количества жизнеспособных протопластов и клеток
2.9.4. Определение количества инфицированных протопластов
2.10. Определение активности РНКазы и протеиназ
2.11. Изучение "киллера протопластов"
2.11.1. Получение неочищенного препарата
"киллера протопластов“
2.11.2. Очистка "киллера протопластов" диализом и высаливанием сульфатом аммония
2.11.3. Очистка "киллера протопластов" методом гель-фильтрации
2.11.4. Очистка "киллера протопластов" методом ионнообменной хроматографии
2.11.5. Ферментативная обработка "киллера протопластов"
2.11.6. Выделение водорастворимых фенольных соединений
2.12. Определение концентрации белка в пробах
2.13. Определение проницаемости клеточных мембран
2.14. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Устойчивость чувствительных и сверхчувствительных
растений табака к механическому заражению ВТМ
3.1. Связывание вируса инокулюма листьями

3.2. Инактивация ВТМ в межклеточном пространстве листьев
3.2.1. Морфологические изменения частиц ВТМ
3.2.2. Изменения инфекционности препаратов ВТМ
3.2.3. Активность протеиназ и РНКаз в межклеточном пространстве листьев
3.3. Образование инфекционных центров в механически инокулированных листьях
3.4. Определение числа зараженных клеток в механически инокулированных листьях
3.5. Связывание 14С-ВТМ изолированными протопластами
3.5.1. Влияние продолжительности инокуляции
3.5.2. Влияние pH
3.5.3. Зависимость связывания от концентрации вируса и количества протопластов
Глава 4. Накопление и транспорт ВТМ в растениях с разной
реакцией на вирусное поражение
4.1. Накопление штамма ОМ ВТМ в разных модельных системах
4.1.1. Опыты с интактными листьями
4.1.2. Опыты с дисками из листьев
4.1.3. Опыты с изолированными протопластами, зараженными в условиях in vitro
4.1.4. Опыты с изолированными протопластами, зараженными в условиях in vivo
4.2. Накопление штаммов ОМ и 412 в интактных листьях и изолированных протопластах
4.2.1. Опыты с интактными листьями
4.2.2. Опыты с изолированными протопластами,

Однако постепенно были накоплены факты, свидетельствующие о том, что эти изменения не обеспечивают полной локализации вируса в некрозах. Вирусные частицы были обнаружены в клетках, расположенных за пределами некрозов [Смирнова, 1955; Hayashi, Matsul, 1965; Milne, 1966 b,c; Shimomura, 1972; Allison, Shalla, 1974; Stobbs et al., 1977; Шмыгля и др., 1989; Hosokawa et af., 19891. Обработка листьев сверхчувствительных растений табака сорта Самсун NN цитри-нином не влияла на локализацию и размножение ВТМ, но подавляла образование локальных некрозов [Takusari, Takahashi, 1979]. Заражение растений огурцов суспензией ВТМ низкой концентрации приводило к локализации вируса без образования некрозов [McKinney, Fulton, 1949; Lindner et al., 1959; Cohen, Loebenstein, 1975]. Тепловая обработка чувствительных растений табака, зараженных ВТМ, индуцировала образование тепловых некрозов, но не приводила к локализации вируса [Foster, Ross, 1975].
В. А. Шмыгля с соавторами [1989] показали, что за пределами некрозов вирус обнаруживается в форме, неинфекционной в соке, но потенциально инфекционной при трансплантации тканей. Они объясняют это тем, что в клетках межнекрозного пространства не образуются зрелые вирусные частицы. Это предположение может оказаться верным, так как в листьях крайне устойчивых растений блокирование транспорта полноразмерной вирусной РНК и зрелого вируса сопровоищается транспортом из первично зараженных клеток вРНП Шорохов, 1985]. Возможно и другое объяснение этих результатов. Можно предположить, что за пределы некрозов транспортировалось очень небольшое число вирусных частиц, которые не способны репродуцироваться и проявить свою инфекционность из-за активации защитных реакций, например, накопления антивирусных