Идентификация нуклеотидных последовательностей генов, экспрессирующихся при регенерации хрусталика и сетчатки у хвостатых амфибий

• Автор: Маркитантова, Юлия Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1996
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 184 с.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Предшествующий этап исследования регенерации
1.2. Модели регенерации
1.3. Молекулярно-биологические подходы к исследованию
механизмов регенерации
1.4. Экспрессия специфических белков и генов в процессе
регенерации конечности и хвоста у низших позвоночных животных
1.4 а. Иммуноцитохимические исследования экспрессии спе-
цифических белков
1.4 б. Экспрессия гомеобокс-содержащих генов
1.4 в. Экспрессия рецепторов ретиноевой кислоты
1.5. Экспрессия генов при регенерации хрусталика в системе in vivo и in vitro
1.5 а. Культивирование клеток пигментного эпителия на
эмбриональных стадиях развития. Экспрессия генов при формировании лентоидов
1.6. Экспрессия специфических белков и генов при регенерации сетчатки в системе in vivo и in vitro
II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Оборудование
Реактивы и ферменты
Лабораторные животные и методы исследования
Клонирование кДНК
Дифференциальный скрининг
Анализ дифференциальных клонов
Получение амплифицированных библиотек кДНК
методом олиго(дА)-тейлирования Пой цепи кДНК
Эффективный метод получения амплифицированных библиотек кДНК лигированием 2-х цепочечной кДНК
с бимодальным олигонуклеотидным адаптером
Анализ экспрессии нуклеотидных последовательностей генов с помощью ПЦР
Клонирование фрагмента кДНК в сторону 5’-области нуклеотидной последовательности ЬеЯ-1 с помощью
метода КАСЕ-РСЯ
III. РЕЗУЛЬТАТЫ
III. 1. Разработка нового эффективного метода получения
библиотек кДНК из малых количеств суммарной
РНК, основанного на супрессионном эффекте ПЦР
III. 1 а. Получение амплифицированных библиотек кДНК
методом олиго(дА)-тейлирования Пой цепи кДНК
III. 1.6. Эффективный метод получения амплифицированных библиотек кДНК лигированием 2-х цепочечной кДНК с бимодальным олигонуклеотидным адаптером
111.2. Дифференциальный скрининг обогащенных библио-
тек кДНК. Идентификация новых нуклеотидных последовательностей: ЬеЯ-7 и УеЯ-
111.3. Структурный анализ кДНК клонов ЬеЯ-1 и УеЯ-
111.4. Экспрессия идентифицированных нуклеотидных последовательностей в процессе регенерации тканей
глаза у взрослых тритонов
111.4 а. Экспрессия нуклеотидных последовательностей
LeR-1 и VeR-1 в процессе регенерации хрусталика и сетчатки в библиотеках кДНК, полученных методом олиго(дА)-тейлирования Пой цепи кДНК
111.4 б. Экспрессия нуклеотидных последовательностей
LeR-1 и VeR-1 в процессе регенерации хрусталика и сетчатки в библиотеках кДНК, полученных методом лигирования 2-х цепочечной кДНК с бимодальным олигонуклеотидным адаптером
111.4 в. Экспрессия нуклеотидных последовательностей
LeR-1 и VeR-1 в интактных тканях и органах тритона
111.5. Экспрессия нуклеотидных последовательностей
LeR-1 и VeR-1 в процессе эмбрионального развития тритона
111.6. Клонирование фрагмента кДНК нуклеотидной после-
довательности LeR-1 в сторону 5’- региона с использованием нового подхода 5’-RACE-PCR
IV. ОБСУЖДЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

территорий у взрослых тритонов (Savard, 1995). На основании сравнения изученных паттернов экспрессии Нох-тшоъ при регенерации конечности тритона, авторы считают, что основная функция этих генов - детерминация позиционной информации в нормальной и регенерирующей конечности взрослых тритонов.
К настоящему времени идентифицировано 26 гомеобокссодержащих генов, экспрессирующихся в регенерирующей конечности и хвосте, но ни один из них не является инициатором процесса регенерации, поскольку эти гены выявляются в проксимальной либо дистальной области уже сформированной бластемы (Beauchemin, Savard, 1992; Beauchemin et al., 1994; Gardiner et al., 1995 ).
1.4 в. Экспрессия рецепторов ретиноевой кислоты.
Ретиноевая кислота (РК) хорошо известна как биологически активная форма витамина А и как тератоген. В 1977 году была опубликована работа о необычном характере действия ретиноевой кислоты - оказалось, что ретиноевая кислота вызывает смещение в проксимальном направлении границ формирования структур регенерирующей конечности (Saxena, Niazi, 1977). Ретиноевая кислота обладает морфогенетическим эффектом, который проявляется в удвоении структур конечности в процессе развития и регенерации вдоль проксимо-дистальной, дорсо-вентральной и передне-задней осей конечности (обзоры: Кусулакос, Антон, 1991; Стокум, Миташов, 1990). Несколько лет назад было показано, что ретиноевая кислота оказывает влияние на