Разработка комплексных препаратов для профилактики и диагностики газовой гангрены

• Автор: Грязнова, Диана Васильевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 116 с.

Оглавление
Оглавление
Введение
Глава 1. Обзор литературы
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Материалы
2.2 Методы
Глава 3. Разработка унифицированной технологии изготовления гагреноз-ных анатоксинов с использованием мембранных методов разделения и иммунобиологическая оценка полученных препаратов
3.1. Разработка технологии получения анатоксина септикум
3.2. Усовершенствование технологии получения анатоксина эдематиенс
3.3. Получение анатоксина гистолитикум
3.4. Получение тетраанатоксина
ГЛАВА 4. Получение антительных препаратов
4.1. Получение иммунной лошадиной сыворотки
4.2. Получение иммунных кроличьих сывороток
4.3. Выделение Г(аЬ)2-фрагментов очищенных антител кролика
и лошади
Глава 5. Разработка иммуноферментных тест-систем для экспрессного
определения гангренозных токсинов-анатоксинов (перфрингенс, эдематиенс, септикум, гистолитикум)
5.1. Конструирование иммуноферментных тест-систем
5.2. Авидин-биотиновый вариант ПФТС для индикации гангренозных токсинов-анатоксинов
5.3. Применение ИФА для оценки гангренозных токсинов--анатоксинов в условиях производства
5.4. Оценка авидин-биотинового варианта ИФА при экспериментальной газовой гангрене у животных
Заключение
Выводы
Список литературы

Список ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ЕС - единица связывания МЕ - международная единица
НОММ - номинально отсекаемая молекулярная масса
ИФА - иммуноферментный анализ
ИФТС - иммуноферментная тест-система
ВМП - высокомолекулярные пептиды
СМП - среднемолекулярные пептиды
НМП - низкомолекулярные пептиды

Введение
Широко распространенные во внешней среде клостридии являются возбудителями различных инфекционных заболеваний человека и животных [25,37, 95, 97, 181, 191 240, 241, 284].
Анаэробная газовая инфекция относится к числу травматических кло-стридиозов и характеризуется высокой степенью летальности [41, 267, 268]. Предрасполагающими к развитию газовой гангрены являются открыт ые травмы, трудно поддающиеся хирургической обработке (размозженные раны с явлениями ишемии, некроза, наличием инородных тел и загрязнения почвой, огнестрельные раны, открытые переломы и т.п.), а также послеоперационные раны на толстой кишке или на «ишемических конечностях» на фоне облите-рирующего эндартериита [3,70,112,220,221,271].
Газовая гангрена относится в основном к инфекциям военного времени, когда при массовом травматизме создаются благоприятные условия для инфицирования ран. Вместе с тем, анаэробная газовая инфекция не утратила своего значения и в мирное время, особенно в современных условиях, когда наблюдается повышение уровня дорожно-транспортного, производственного, бытового травматизма, а также ранений и ожогов в результате региональных конфликтов и стихийных бедствий [25,87,176,177,205].
В связи с этим проблема диагностики, лечения и предупреждения кло-стридиозов у людей остается актуальной для здравоохранения.
Анаэробная инфекция является полимикробным заболеванием и вызывается С. регИтепБ типа А, С. осдетаОсш типа А, С. эерйсит, С. 1ш1о1уПсит,
С. 80гс1с111, С. 1а11ах и др. Причем, большинство исследователей в качестве главных называют только первые четыре вида возбудителей. Флора при анаэробной инфекции чаще всего носит полимикробный характер и представляет различные ассоциации самих возбудителей газовой гангрены или же их сочетание с аэробными микроорганизмами [25, 37.111,113,268 ]. При смешанном характере

Таблица
Состав казеиново-панкреатической среды для культивирования С.яерйсиш
Компоненты Количество
Казеин 50 г/л
Панкреатин (активность 45 ед/мл) 7 г/л
Фосфат натрия двузамещенный 2,28 г/л
Фосфат натрия одназамещенный 0,23 г/л
Липоевая кислота 0,002 г/л
Никотиновая кислота 0,002 г/л
Пантотенат кальция 0,002 г/л
Пиридоксин 0,002 г/л
Рибофлавин 0,002 г/л
Тиамина бромид 0,002 г/л
Фолиевая кислота 0,002 г/л
Разработанная питательная казеиново-панкреатическая среда обеспечивала получение токсинов активностью ( 516,67 + 48,01 ) Б1т/мл и (11,17 + 0,83) Ь+ /мл . Следует также отметить, что введение комплекса витаминов в питательную среду повышало активность и стабильность нативных токсинов-анатоксинов септикум.
Одним из основных технологических этапов приготовления анатоксинов, на котором по существу решается вопрос о биологической активности конечного продукта, является детоксикация.
Получение высокоактивных анатоксинов в значительной степени зависит от условий обезвреживания соответствующих токсинов. В случае нерационально выбранных условий детоксикации (pH, температуры, концентрации формалина), наряду с потерей токсичности наблюдается также и снижение свойств антигенной специфичности препарата [37,67,131,160,169,193,208].
В связи с этим, были предприняты исследования по определению оптимальных условий детоксикации токсина септикум. Обезвреживание токсина проводили в культуральной жидкости без предварительного удаления микробных клеток. Отработку схемы обезвреживания проводили при варьирова-