Транспортные АТФазы в фоторецепторной клетке сетчатки

• Автор: Азимова, Армилла Микаил кызы
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 135 c. : ил

Список сокращений •
Введение
Гл.1- Обзор литературы:
1.1. Общие сведения о структуре фоторецепторной клетки. ••*... • . • "10
1.2. Транспортные АТФазы "
1.2.1. Краткие сведения о На,К-АТФазе. ... "15
1.2.2, Краткие сведения о Са,Мв -АТФазе ... "23
1.3. АТФазные системы и активное накопление
иона кальция в фоторецепторной клетке , • . .- "
1.3.1. Наличие АТФазных систем в фоторецепторной клетке,4
1.3.2. Перемещение иона Са в фоторецепторной клетке, , • . • • • . • • • • • . "
Гл. 2- Материал и методы исследования:
2.І.іІолучение различных препаратов фоторецепторной клетки,их характеристика, , • • • . "42
2.1.1. Выделение НСП и ВСП.
2.1.2. Получение разрушенных препаратов НСП . "
2.1.3. Получение везикул НСП и ВСП. "
2.1.4. Характеристика полученных препаратов . "
2.2.0пределение активности їїа,К-, Mg -, Са,Мв-,
Са-АТФаз и количества неорганического фосфата "
2.3.Определение активности К-зависимой уабаин-чувствительной п-нитрофенилфосфатазы,
2,4.Определение АТФ-зависимого накопления иона
Са . "49
2.5.Индукция перекисного окисления липидов. ... "50
2.6.Использованные реактивы,препараты и приборы. . "
2.7.Статистическая обработка. •»..••.••• "

Гя. 3-Результаты исследований
3.1. Локализация На,К- и Mg -АТФаз в фоторецепторной клетке палочки.'
3.2. О латентной Ша,К-АТФазе наружных сегментов палочки сетчатки
3.2.1. Влияние разрушения структуры наружных сегментов(гипотоническим шоком)
на Ка,К-АТФазную активность, . , . . . "
3.2.2. Влияние люброла на На,К-АТФазу, . . . "
3.3. Локализация Са,1%- и Са-зависимой АТФаз
в фоторецепторной клетке.
9л.
3.4. АТФ-зависимое накопление Са в фоторе-
- цепторной клетке.
3.5. Влияние освещения на На,К- и Мв -АТФазные активности фоторецепторной клетки. ... "
3.5.1. Фотоиндуцированные изменения активности АТФазных систем
3.5.2. Возможные механизмы фотоиндупирован- . ных изменений ферментативной активности
Обсуждение "100
Выводы
Список использованной литературы
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВС- внутренний сегмент ВСП-внутренний сегмент палочки НС- наружный сегмент НСП- наружный сегмент палочки ПМ -плазматическая мембрана л-НФФ- паранитрофенилфосфат ПОЛ- перекисное окисление липидов СР -саркоплазматический ретикулум ФЛ -фосфолипиды ФМ - фоторецепторные мембраны Фн- неорганический фосфат

ции прошвали 20 мМ трыс-HCl буфером (pH 7,4) для удаления несвя-45„
запного Са. Фильтры высугаивали и помещали в сщшпилляционную жидкость,объемом 5 мл п содержащую на I л толуола 50 мг П0П0П и 40 г ПОП. Количество накопленного в везикулах кальция выражали в нмолях Са на мг белка.
2.5. ИНДУКЦИЯ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ
Для индукщш ПОЛ во фракциях НСП и ВСП использовали систему, содержащую 0,3 мкМ PeSO^ и 0,2 мМ аскорбата(Белоусова и др., 1977) инкубируя суспензии НСП и ВСП(0,5-0,8 мг белка/мл среды) в аэробных условиях(рН 7,4),при 20°С,Ю минут в темноте. В некоторых опытах для предотвращения процесса ПОЛ в ряд проб добавляли антиоксиданты: 5« 10“% иопола,10“% селенита натрия или 2-1СГ4 М витамина Е. Для остановки ПОЛ фракции охлаждали до 0°С, разводили 1:10 0,25 М раствором сахарозы и осаждали при 8 000g в течение 10 минут. Образовавгаийся осадок использовали для проведения АТЗазпой реакции.
Индукцию П0Л(без PeSO^ п аскорбата) лрово.дили и путем освещения ( Kagan et al.,1973) лампой накаливания мощностью 200 вт через водяной фильтр. При этих условиях освещенность препаратов составляла I 500 люкс.
2.6. ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ РЕАКТИВЫ, ПРЕПАРАТЫ И ПРИБОРЫ
В работе использовали советские реактивы "хч" или "чда" и реактивы зарубежных фирм: АТФ и трис(гидроксиметиламшометан)-фирмы 11 Reanal ", тритон Х-100 фирмы " Schuchardt", ОДИГОМН1Ш11 II ЭГТА фирмы " Sigma ".
Для спектральных измерений применяли двухлучевой спектрофотометр фирмы "Бэкман ДБ", для записи спектра родопсина-спектро-фотометр СФ-10 с чувствительной приставкои(Берман,1970).