Сателлитные ДНК цитрусовых растений

• Автор: Брагвадзе, Георгий Парнаозович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Тбилиси
• Количество страниц: 118 c. : ил

СОКРАЩЕНИЯ
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
I. Локализация и количественное содержание
ДНК в клетках высших растений
1. Ядерная ДНК
2. Митохондриальная ДНК
3. Хлоропластная ДНК
П. Характеристика разных классов последовательностей яДНК и организация генома
высших растений
1. Уникальные последовательности
2. Обращенные повторы
3. Повторяющиеся последовательности
Ш. СтДНК высших растений
1. Распространение
2. Свойства
3. Локализация и возможные функции
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Объекты исследования
2. Выделение ядер
3. Выделение яДНК
4. Выделение суммарной ДНК
5. Очистка ДНК
6. Выделение ДНК ЫЬсгососиэ 1узос1е1к1;1сиз
7. Определение концентрации ДНК по Бартону
8. Фрагментация молекул ДНК
9. Аналитическое равновесное ультрацентрифугирование в градиенте плотности Сз01
10. Аналитическое равновесное ультрацентрифугирование в градиенте плотности актиноМИЦИН Ц-СэС1
11. Аналитическое равновесное ультрацентрифугирование в градиенте плотности н§++-Сз2зо4

12. Препаративное ультрацентрифугирование
в градиенте плотности СзС1
13. Препаративное ультрацентрифугирование
в градиенте плотности %++-Сз2зо4
14. Хроматография ДНК на колонке МАК
15. Тепловая денатурация препаратов ДНК
16. Изучение кинетики реассоциации
17. Рестрикционный анализ ДНК эндонуклеазой рестрикции Вар I
18. Расчеты состава оснований
19. Расчеты содержания пгс
20. Реактивы
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
X. О гетерогенности дДНК цитрусовых растений
П. Выделение стДНК цитрусовых растений в
чистом виде
Ш. Определение количественного содержания
стДНК в геноме цитрусовых растений
1У. Физико-химические свойства компонентов
ДНК трех видов цитрусовых растений
1. Дифференциальные кривые плавления
2. Кинетика реассоциации
3. Распределение стДНК цитрусовых растений
в градиенте плотности актиномицин в-СзС1
4. Рестрикционный анализ стДНК цитрусовых
растений
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

СОКРАЩЕНИЯ: яДНК - ядерная ДНК хлДНК - хлородластная ДНК мтДНК - митохондриальная ДНК стДНК - сателлитная ДНК рДНК - рибосомная ДНК рРНК - рибосомная РНК иРНК - информационная РЖ тРНК - транспортная РНК ш5с - 5-метилцитозин
Тдл - температура плавления - значение температуры, при которой увеличение поглощения УФ-света достигает половины максимальной величины I х SSC - 0,15 М NaCl, 0,015 М цитрат натрия, pH 7,0 DS-lIa - додецилсульфат натрия п.н. - пара нуклеотидов
С - содержание ДНК в гаплоидном наборе хромосом, пг. et- произведение концентрации ДНК и времени инкубации, моль нуклеотидов • литр-1.сек.

25 oz.
» 10,8601 n£- 13, 4974
Фотопластинки (УФШ-3) фотометрировали на быстродействующем микрофотометре g II в сочетании со стандартным компенсационным самописцем GIBI (" Carl Zeiss Jena”, ГДР). Плавучую плотность рассчитывали по формуле:
где jo0 - плавучая плотность ДНК M.lysodeikticus равная 1,731 г«см-3, со - угловая скорость вращения, рад/сек; иХ0 - расстояние от оси вращения до исследуемой ДНК и ДНК-стандар-та, соответственно.
10. Аналитическое равновесное ультрацентрифугирование в градиенте плотности актиномицин D-CsCl проводили по методу, описанному Пикоком и соавт. ( Peacock et al., 1974). Препараты ДЕК диализовали против 0,01 М трис- НС1 , содержащего 0,00Ш ЭДТА, pH 8,4, и прибавляли актиномицин в . Весовое соотношение актиномицин d/ДНК варьировало в пределах 0,25-1,5. Далее к раствору приливали насыщенный CsCi до конечной концентрации 1,640-1,665 г*см“3 ( п^р = 1,3939-1,3962). Ультрацентрифугирование проводили в таких же условиях, как для градиента плотности CsCi.Плавучую плотность рассчитывали по формуле Шилдкрау-Та И соавт, ( Schildkraut et al., 1962).
11. Аналитическое равновесное ультрацентрифугирование в градиенте плотности Hr**- Cs2S0/] проводили по методу Нанди и соавт. ( Nandi et al.,1975). Препараты ДНК интенсивно диализи-ровали против 0,1 М Ua2so^ и 0,005 М боратного буфера, pH 9,2. Компоненты смешивали в следующем порядке: 0,5 мл насыщенного раствора Cs2SO^ в 0,005 М боратном буфере, pH 9,2; 0,1 мл