Функциональные группы активного центра и механизм действия глутаминсинтетаз листьев гороха

• Автор: Акентьева, Наталья Павловна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 177 c. : ил

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава I. СТРУКТУРА И КИНЕТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ГЛУТАМИНСИНТЕТАЗ
1.1. Четвертичная структура глутаминсинтетаз
1.2. Аминокислотный состав глутаминсинтетаз
1.3. Вторичная структура глутаминсинтетаз
Глава 2. СТРУКТУРА АКТИВНОГО ЦЕНТРА ГЛУТАМИНСИНТЕТАЗ
2.1. Функциональные группы активного центра глутаминсинтетаз
2.2. Пространственная организация, локализация и число активных центров глутаминсинтетаз
Глава 3. МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ГЛУТАМИНСИНТЕТАЗ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Объект исследования и условия выращивания опытного материала
4.2. Методы определения активности
а) гидроксаматный метод
б) фосфатный метод
4.3. Определение белка
4.4. Аналитический электрофорез в полиакриламидном геле
4.5. Метод скорости седиментации
4.6. Определение аминокислотного состава фермента
а) Гидролиз белка
б) Определение цистеина

4.7. Метод кругового дихроизма
4.8. Определение содержания двухвалентных металлов
4.9. Химическая модификация б Н-групп цистеина
4.10. Определение констант ионизации субстратсвязывающих групп на основе изучения влияния pH на
4.11. Фотоокисление фермента в присутствии метиленового синего
4.12. Метод субстратной защиты фермента от ингибирования сульфгидрильными реагентами
4.13. Ингибирование глутаминсинтетазы метионинсульфокси-мином
4.14. Метод субстратной защиты глутаминсинтетазы от ингибирования метионинсульфоксимином
4.15. Метод субстратной защиты фермента от тепловой инактивации
Глава 5. ВДЕЛЕНИЕ И ОЧИСЖА ГЛУТАМИНСИНТЕТАЗЫ ИЗ ЦИТОЗОЛЯ
И ХЛОРОНЛАСТОВ ГОРОХА
Глава 6. СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ГЛУТАМИНСИНТЕТАЗЫ ИЗ
ЦИТОЗОЛЯ И ХЛ0Р0ПЛАСТ0В ГОРОХА
6.1. Определение аминокислотного состава глутаминсинтетазы
из цитозоля
6.2. Вторичная структура глутаминсинтетазы из хлоро-пластов гороха
6.3. Содержание металлов в молекуле глутаминсинтетазы
из хлоропластов гороха
Глава 7. КИНЕТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ГЛУТАМИНСИНТЕТАЗЫ ИЗ
ЦИТОЗОЛЯ И ХЛОРОПЛАСТОВ ГОРОХА
Глава 8. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ГРУППЫ АКТИВНОГО ЦЕНТРА ГЛУТАМИНСИНТЕТАЗЫ ЦИТОЗОЛЯ И ХЛОРОПЛАСТОВ ГОРОХА

8.1. Химическая модификация ян-групп цистеина сульфгидрильными реагентами
8.2. Определение констант ионизапии субстратсвязывающих групп на основе изучения влияния pH на
8.3. Защитное действие субстратов и кофакторов от ингибирования глутаминсинтетазы из цитозоля и хлоро-пластов гороха сульфгидрильными реагентами
Глава 9. МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ГЛУТАМИНСИНТЕТАЗЫ ИЗ ЦИТОЗОЛЯ
И ШРОПЛАСТОВ ГОРОХА
9.1. Изучение механизма действия глутаминсинтетазы из цитозоля и хлорошгастов гороха с использованием специфического ингибитора - метионинсульфоксимина
9.2. Изучение механизма действия глутаминсинтетазы из цитозоля и хлорошгастов гороха методом отационарной кинетики
9.3. Защитное действие субстратов и кофактора от тепловой инактивации глутаминсинтетазы из
цитозоля и хлорошгастов гороха
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ГС~глутамат является реакционно способным комплексом, который на последнем этапе спонтанно реагирует с и с образованием Фн,
АДФ и глутамина:
ГС~глутамат + ин| + ъ -глутамин + АДФ + Фн
Дальнейшие исследования привели к представлению о том, что синтез глутамина имеет несколько иной механизм. Виланд и сотр.
/ Wieland et al ,1958/, используя ГС из того же источника, предположили, что АТФ связывается с ГС через s Н-группы активного центра фермента. При этом в сумме затрачивается две молекулы АТФ: одна из них, расщепляясь, высвобождает энергию для образования связи межцу ферментом и второй молекулой АТФ:
ГС-S Н + АТФ ГС- s Ф + АДФ.
ГС-Б^Ф + АТФ ГС - S АТФ + Фн.
Далее обрабовавшийся высокоэнергетический интермедиат ГС -S АТФ реагирует с глутаматом и образуется активированный комплекс с глутаминовой кислотой. При этом глутаминовая кислота соединяется через остаток фосфорной кислоты с ферментом, что приводит к отщеплению АДФ:
ГС - s АТФ + глутамат ГС - s Ф -глутамат+АДФ.
Активированная глутаминовая кислота далее реагирует с аммонием, в результате чего образуется глутамин и фоефорилированный энзим:
? Я
гс-s -p-o-d(CH2)2-ai-cooH + нн3 *-со ин2-(ш2)2-сн-сюон+
он рн ' н'н2 ' А2
+ ГС - S -Р