Транскрипция Tol плазмиды pWWO и индукция синтеза катехол-2,3-диоксигеназы у Pseudomonas putida MT-2

• Автор: Кильк, Анн Хуговна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Тарту
• Количество страниц: 159 c. : ил

СОКРАЩЕНИЯ
I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Периферийный катаболизм ароматических соединений у псевдомонад
1.2. Биохимическая характеристика метаболических путей, обусловленных ТОЬ плазмидами
1.2Л. Деградация толуола и его производных у
штаммов Р. риізісіа
1.2.2. Ферменты расщепления толуола и его
производных
1.2.2.1. Субстратная специфичность ферментов
1.2.2.2. Ключевые ферменты
1.2.2.3. Катехол-2,3-диоксигеназа
1.2.2.4. Катехол-2,3-диоксигеназа, как маркер экспрессии ТОЬ -плазмидных генов
1.3. Генетическая и молекулярно-биологическая характеристика ТОЬ плазмид
1.3.1. Общие свойства и строение ТОЬ плазмид
1.3.1.1. Иэофункциональность
1.3.1.2. Температурочувствительность
1.3.1.3. Конъюгативность
1.3.1.4. Образование рекомбинантов с Е плазмидами
1.3.1.5. Устойчивость к атомарному кислороду и ультрафиолетовому облучению
1.3.1.6. Бенэоатная элиминация
1.3.2. Физическая и генетическая структура ТОЬ плазмиды рШО
1.4. Экспрессия тоь -плазмидных генов
1.4.I. Доминирование плазмидного пути расщепления ароматических соединений у штаммов

Р. ри1;1<3.а
1.4.2. Генетическая регуляция активности ТОЬ-плазмидных генов .
1.4.3. Условия экспрессии ТОЬ -плазмидных
генов
1.4.4. Транскрипция генов ТОЬ плазмиды
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Основные препараты и реактивы
2.2. Штаммы бактерий
2.3. Питательные среды
2.4. Условия культивирования микробов
2.5. Условия индукции плазмидных ферментов
2.6. Определение активности ферментов
2.6.1. Приготовление бесклеточного экстракта
2.6.2. Определение сухого веса бактерий
2.6.3. Определение активности К230
2.6.4. Определение активности гидролазы 2ГМПА
2.6.5. Определение активности К120
2.7. Частичная очистка К230
2.8. Определение синтеза белка во время индукции активности К230
2.8.1. Радиоактивное мечение белков
2.8.3. Электрофорез белков в ПААГ-е
2.9. Изучение синтеза РНК во время индукции
активности К230

2.9.1. Включение Р-ортофосфата в клетки бактерий
2.9.2. Включение %-урацила в лабильную РНК
2.9.3. Выделение суммарной РНК
2.9.4. Анализ препаратов суммарной РНК
2.10. Выделение ТОЬ-плазмидоспецифической РНК
2.10.1. Иммобилизация ТОЬ -плазмидной ДНК на сефарозе 2В
2.10.2. Очистка ТОЬ -плазмидоспецифической

2.11. Изучение ТОЬ -плазмидной ДНК
2.11.1. Выделение и очистка плазмидной ДНК
2.11.2. Анализ плазмидной ДНК

2.П.З. Выделение из геля рестрикционных фрагментов плазмидной ДНК
2.12. Гибридизация РНК-ДНК в капилляре
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Изучение динамики индукции активности К230
3.1.1. Определение активности К230
3.1.2. Стабильность К230
3.1.3. Динамика индукции активности К230
3.2. Синтез белка во время индукции активности К230
3.3. Синтез РНК во время индукции К230
3.3.1. Изучение синтеза лабильных РНК
3.3.2. Состав РНК, синтезированной во время индукции К230
3.3.3. Выделение ТОЬ -плазмидоспецифических

3.3.4. Изучение динамики синтеза ШОЬ -плазмидоспецифических РНК
3.4. Локализация активно транскрибируемых участков в геноме плазмиды рщо
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Индукция активности К230
4.2. Транскрипция ТОЬ плазмиды рШО
4.3. Локализация активно-транскрибируемых регионов тоъ плазмиды рШО
5. ВЫВОДЫ
Литература

плазмидо специфических субстратах как на единственном источнике углерода и энергии, а сам субстрат является индуктором синтеза плазмидоспецифических ферментов /41, 75, 115/. В этом случае весь метаболизм клетки направлен через экспрессию плазмидных генов. Известно, что в течение лаг-периода после пересева клеток на бедную среду в них содержится больше рибосом, чем они способны использовать, синтез рибосомных РНК прекращается, что облегчает в этот период выявление синтеза бактериальных мРНК /183/. Если при этом происходит переключение клеточного метаболизма на плазмид-ный путь, то это, по всей вероятности, создает возможность обнаружения и TOL -плазмидоспецифических мРНК.