Способ получения, физико-химические и иммунохимические свойства лактоферрина коров

• Автор: Карабаев, Борис Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 117 c. : ил

С ОДЕРЖАНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Основные свойства лактоферрина животных
и человека
1.1.1. Химические свойства лактоферрина
1.1.2. Физико-химические свойства и особенности строения лактоферрина
1.1.3. Противомикробные свойства лактоферрина
1.1.4. Методы определения лактоферрина
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Образцы молозива и способ их
обработки
2.1.2. Выделение лактоферрина
2.1.2.1. Краткий обзор существующих методов выделения лактоферрина
2.1.2.2. Выделение лактоферрина по
2.1.2.3. Выделение лактоферрина по
й. оС •* •
2.1.3. Определение концентрации белка
по Лоури
2.1.4. Диск-электрофорез в полиакриламидном геле
2.1.5. Метод определения содержания железа
2.1.6. Метод электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия

2.1.7. Метод получения антисывороток
2.1.8. Реакция диффузионной преципитации в
агаре по Оухтерлони
2.1.9. Реакция радиальной иммунодиффузии
по Манчини
2.1.10. Иммуноэлектрофорез в геле по Грабару
2.1.11. Определение бактериостатической активности лактоферрина
2.1.12. Статистическая обработка полученных результатов
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Характеристика полученного препарата лактоферрина, методов его выделения и очистки
2.2.2. Определение молекулярной массы лактоферрина
2.2.3. Получение и анализ специфических антисывороток против лактоферрина
2.2.4. Динамика концентрации лактоферрина в секрете молочной железы коров в период лактации
2.2.5. Содержание лактоферрина в молоке коров, больных маститом
2.2.6. Анализ противомикробной активности препарата лактоферрина
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

В Программе КПСС указывается: " Создание наряду с могучей промышленностью процветающего, всесторонне развитого и высокопродуктивного сельского хозяйства - обязательное условие построения коммунизма". В Отчетных докладах ЦК КПСС ХХУ и ХХУ1 съездам КПСС вопросам сельского хозяйства отведено особое место. "В нашей стране будет и дальше расти потребление наиболее ценных продуктов питания, в частности, молока и мяса”, - такую задачу партия ставит на десятую и одиннадцатую пятилетки. В продовольственной Программе СССР, принятой майским (1982 г.) Пленумом ЦК КПСС, важное место отводится развитию молочного животноводства.
Успешное развитие молочного животноводства возможно лишь при условии проведения большой селекционной работы и создания новых высокопродуктивных пород. Для успешного выполнения этой работы необходимо понимание физиологических и биологических закономерностей, глубокое проникновение в сущность обменных процессов в организме сельскохозяйственных животных, точные знания б области иммунологии.
Лактоферрин животных и человека относится к числу неклеточных факторов неспецифического иммунитета. Обнаружение его не только в секрете молочной железы, но и в других биологических жидкостях организма, позволяет считать лактоферрин специфическим биохимическим маркером секретирующей эпителиальной ткани.
Обладая рядом свойств, присущих и другим гликопротеидам, лактоферрин, как это было показано in vitro , вызывает ингибирование роста многих бактерий, вызывающих такие серьезные

объемом иммунной сыворотки (конечная концентрация агара 1,5%), разливали по 3 мл на предметные стекла или по 25 мл на стекла размером 9 х 12 см. Антисыворотку предварительно разводили / в 5, 10, 20, 30, 40 или 50 раз физиологическим раствором для определения оптимальной степени разведения.
В лунки, вырезанные в геле специальным штампом, вносили препараты лактоферрина, взятого в концентрации 175, 350, 700, 1400 и 2800 мкг/мл, для построения калибровочного графика, и гели инкубировали 1,5-2 суток при комнатной температуре во влажной камере. При определении содержания лактоферрина в секрете молочной железы в период лактации в качестве антигена использовали пробы цельного молозива и молока или разведенные 1/2 и 1/4. Для определения концентрации лактоферрина при мастите образцы молока из здоровых четвертей вымени разводили 1/2 и 1/4, а из маститных четвертей вымени - 1/2, 1/4 и 1/8.
Диаметр колец преципитации измеряли с помощью линейки Беринг-Верке до и после окрашивания гелей. Окрашивание и отмывание гелей проводили, как это описано в предыдущем разделе. Для построения калибровочного графика мы брали квадрат диаметров колец преципитации как функцию логарифма концентрации лактоферрина. Типичный калибровочный график представлен на рис.4.
2.1.10. Иммуноэлектрофорез в геле по Грабару
Принцип метода иммуноэлектрофореза состоит в предварительном электрофоретическом разделении смеси белков в геле и последующей иммунопреципитации их со специфической антисы-