Синтез и применение липид-специфических фотореактивных зондов

• Автор: Водовозова, Елена Львовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 133 c. : ил

Список сокращений
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Принципы фртореактивного зондирования
мембран
1.2. Применение фотореактивных реагентов для исследования липид-белковых взаимодействий
1.2.1.- Неспецифические мембранные зонды
1.2.2. Фотореактивные жирные кислоты
1.2.3. Фосфолипидные зонды
1.2.4. Гликолипидные зонды
1.3. Исследование липид-липидных взаимодействий
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУВДЕНИЕ
П.1.1. Синтез фотореактивных ^С-меченых
фосфатидилхолина 2-РС и сфингомиелина 2-SM
П. 1.2. Синтез фотореактивных ^С-меченых фосфатидилхолина I2-PC и сфингомиелина I2-SM
П. 1.3. Синтез фотореактивных фосфатидилхолина I2-PC и сфингомиелина I2-SM с высоким уровнем тритиевой метки
П.2. Локализация фотореактивной метки
фосфолипидных зондов в липидном бислое
П.З. Изучение липид-белковых взаимодействий
в мембране вируса гриппа
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Ш.1. Синтез фотореактивномеченых фосфолипидов

Ш.2. Везикулы для спектроскопии %-ЯМР
и регистрация спектров
Ш.З. Образцы вируса гриппа
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

Список сокращений
БСА - бычий сывороточный альбумин
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ДМАП - 4-диметиламинопиридин
ДМСО - диметилсульфоксид
ДОФ - диолеоилфосфатидилхолин
ДПФ - дипальмитоилфосфатидилхолин
ДСК - дифференциальная сканирующая калориметрия
ДСН - додецилсульфат натрия
ДЦК - дициклогексилкарбодиимид
ЛВП - липопротеины высокой плотности
НАР - 2-нитро-4-азидофенил
12-РА - Н-(2-нитро-4-азидофенил)-12-аминододекановая кислота 2-РС - 1-ацил-2-[Н-(2-нитро-4-азидофенил)глицил]-вп-глицеро-3-фосфохолин
12-РО - 1-ацил-2-рМ2-нитро-4-азидофенил)-12-аминододеканоилф-Бп-глицеро-З-фосфохолин 2-БМ - Ш-[Н-(2~нитро-4-азидофенил)глицил] сфингозин-1-фосфохолин 12-БМ - Н-рМ2-нитро-4-азидофенил)-12-аминододеканоил]сфингозин-1-фосфохолин
РРУ - вирус классической чумы птиц, вирус гриппа типа А РРУд - ремантадинчувствительный штамм РРУ5 - ремантадинустойчивый штамм НА - гемагглютинин
НА| - большая субъединица гемагглготинина
НА^ - малая субъединица гемагглютинина
М - матриксный белок
ЫА - нейраминидаза
ИР - нуклеокапсидный белок
РрРз - нуклеопротеиды
01с - глюкоза

сится к Val(3).-Ha N-конце фермента находится заряженный остаток серина, с которым фосфатная груша зонда может образовать ионную пару. Это предположение подтверждается данными о том, что у панкреатического фермента (имеет очень близкое с фосфолипазой А£ из яда змеи строение) Н-концевой участок направлен в активный центр /897.
В отличие от зонда с природной конфигурацией, рацемический аналог реагировал как с N-концевым фрагментом фосфолипазы Аг>, так и с центральным участком 43-97. Полученный результат, по мнению авторов [Щ/, свидетельствует о том, что участки полярных головок D- и L-фосфолипидов по-разному расположены в активном центре фермента на его поверхности. Известно, что фосфолипаза А£ абсолютно специфична в отношении ь-фосфолипидов, а D-фосфолипиды являются конкурентными ингибиторами. Таким образом, роль полярных головок фосфолипидов в формировании комплекса фосфолипаза-субстрат, по-видимому, весьма важна.
4. Гликолипидные зонды
Вйшнески и сотр. /90/ синтезировали фотореактивный [^С]сте-ароилглюкозамин (32) (см. табл.1), содержащий 4-азидо-2-нитрофе-нильную (НАР) группировку в w-положении жирнокислотной цепочки. Исследования, проведенные со спин-меченым аналогом зонда (32) показали, что в интактной вирусной мембране он локализуется только во внешней части липидного бислоя /§17.
Те же авторы /927 исследовали липид-белковые взаимодействия в вирусе болезни Ньюкасла, оболочечном парамиксовирусе. Частицы этого вируса содержат 6 белков: VP1,VP2 - гликопротеины, VP3