Полиморфизм ряда дегидрогеназ и динамика их множественных форм в коже овец в процессе шерстеобразования

• Автор: Робак, Владимир Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Львов
• Количество страниц: 169 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ Стр>
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Обмен веществ в коже и рост шерсти у овец
1.1.1. Анатомо-физиологические особенности кожи овец
1.1.2. Синтетические процессы в коже. Формирование кератина в волосяных фолликулах
1.1.3. Катаболизм в коже. Синтез макроэргических соединений
1.1.4. Взаимосвязь обмена веществ в коже с биохимическими показателями крови овец и с шерстной продуктивностью
1.2. Полиморфизм ферментов и его роль в регуля-
§;ии метаболизма
раткий очерк изучения полиморфизма ферментов. Механизмы возникновения. Классификация
1.2.2. Множественные формы некоторых оксидоредук-таз и их регуляторная роль
1.2.3. Изоферменты кожи
1.2.4. Изоферменты оксидоредуктаз в организме
овец
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материал и методика исследований
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Рост шерсти,ее структура,химический состав и физические свойства у овец породы мери-нофляйш
2.2.2. Изучение активности и полиморфизма ферментов в коже
2.2.2.1. Лактатдегидрогеназа
2.2.2.2. Малатдегидрогеназа
2.2.2.3. Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа
2.2.2.4. Глютаматдегидрогеназа
2.2.3. Активность и полиморфизм ферментов плазмы
крови
2.2.3.1. Лактатдегидрогеназа
2.2.3.2. Малатдегидрогеназа
2.2.3.3. Глютаматдегидрогеназа
2.2.4. Электрофоретическая характеристика изоферментов кожи в сопоставлении с ее растворимыми белками
2.2.5. Множественные формы ферментов плазмы крови
в сопоставлении с другими ее белками
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
ЛИТЕРАТУРА

Успешное решение важной народнохозяйственной проблемы количества и качества шерсти неразрывно связано с изучением процессов,протекающих в организме овец и обуславливающих шерстеобразование. В первую очередь это относится к метаболическим процессам в коже,сведения о которых пока весьма скудны, к тому же зачастую противоречивы. В этой важной проблеме особое значение приобретает поиск биохимических показателей, в наибольшей степени отражающих интенсивность процессов шерстеобразования, а значит и раскрывающих механизмы целенаправленного влияния на шерстную продуктивность овец в целом.
В этом плане несомненный интерес представляют исследования множественных форм ферментов. После того,как было обнаружено явление гетерогенности белков, начались предприниматься попытки установления взаимосвязи активности их отдельных множественных форм с продуктивными качествами животных. Подобного рода исследования,выполненные на овцах, касались в основном белков крови и, к сожалению, не дали пока желаемых результатов. Что же касается сведений о гетерогенности ферментов плазмы крови, а тем более кожи, то они практически отсутствуют.
Учитывая изложенное, целью наших исследований стало изучение взаимосвязи динамики активности ряда дегидрогеназ кожи и плазмы крови овец с ростом шерсти, ее структурой и физическими показателями. Выбор нами дегидрогеназных систем в качестве исследуемых показателей обусловлен тем, что, во-первых, они катализируют ключевые реакции в отдельных метаболических путях, а во-вторых, образуемые в этих реакциях вое-

становленные эквиваленты могут использоваться для синтеза макроэргических соединений, то есть они важны в энергетическом отношении. Вместе с тем мы задались целью апробировать феномен гетерогенности ферментов кожи и плазмы крови как универсальный маркер высокой шерстной продуктивности овец, а кроме того - изучить взаимоотношения уровня общей активности и активности отдельных множественных форм исследуемых ферментов в коже и плазме крови.
Полученные данные позволяют нам сделать вывод о том, что между уровнем активности исследуемых дегидрогеназ кожи и плазмы крови, а также их отдельных множественных форм и ростом шерсти существует коррелятивная взаимосвязь.
На защиту выносятся следующие положения:
-активность дегидрогеназ кожи и плазмы крови и их отдельных 1/можественных форм в течение года подвержена колебаниям и в целом проявляет опеределенную коррелятивную взаимосвязь с ростом шерсти ;
-величина этой взаимосвязи изменяется в различные периоды года, но, как правило, бывает выше для отдельных множественных форм, чем для общей активности соответствующих ферментов ;
-уровень общей активности ГлДГ кожи и плазмы крови проявляет максимальную взаимосвязь со структурными компонентами шерстного волокна;
-изучаемые ферменты кожи и плазмы крови, а также их отдельные множественные формы / за исключением ДЦГ и ее изоформ/ не проявляют взаимосвязи в динамике годичных изменений своей активности.

став среды использовался для выявления множественных форм НАД-зависимой малатдегидрогеназы, однако в качестве субстрата вместо лактата лития использовался 0,02М яблочнокислый натрий. Идентификация зон с глютаматдегидрогеназной активностью производилась в среде следующего состава: 0,06М раствор глутамата натрия, 1,5 мг НАД, 1мг нитро СТ, 0,1 мг ФМС, 2,5 мл 0,5М трис-HCI буфер pH 7,1. Множественные молекулярные формы глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы выявляли с помощью следующей инкубационной среды: 0,01М раствор натриевой соли глюкозо-6-фоефата, I мг НАДФ, 0,5 мг нитро СТ, 0,1 мг ФМС, 2,5 мл 0,5М трис-HCI буфер pH 7,1. Приготовление инкубационных сред было строго стандартизировано и производилось ex tempore.
Инкубацию проводили в темноте при температуре 37 С в течение одного часа. Бессубстратное восстановление тетразо-лия контролировали путем инкубации гелей в смеси без субстрата. После инкубации гели промывали в дистиллированной воде и сохраняли в смеси следующего состава: вода-этанол-ук-сусная кислота 30:10:1.
Фотографировали гели под слоем жидкости указанного состава в проходящем свете. Идентификацию трансферрина в спектре растворимых белков кожи и плазмы крови производили по методике Кларка /165/.
Вся работа выполнена с использованием одной партии реактивов: ФМС-фирмы "Fluka и ; НАД, НАДН, НАДФ, натриевая соль глюкозо-6-фосфата-фирмы "Reanal " ; нитро СТ, глютаминовая кислота и ЭДТА-фирмы " Cbemapol” ; остальные реактивы -отечественного производства. Для приготовления полиакриламидного геля использовался стандартный набор реактивов фирмы