Стимуляция секреции инсулина имидазолиновыми соединениями и инозитолгексафосфатом

• Автор: Ефанов, Александр Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 144 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Механизмы секреции инсулина (3-клетками поджелудочной 10 железы
1.1. Функции островков Лангертанса поджелудочной железы и 10 секретируемые ею гормоны
1.2. Метаболизм глюкозы
1.3. Электрическая активность (3-клетки АД ::■ < л
1.4. Роль увеличения [Са2+]1 в механизмах секреции инсулина
1.5. Фосфорилирование белков и секреция инсулина
1.6. Механизмы экзоцитоза содержащих инсулин секреторных 23 гранул
1.7. Возможные дефекты в регуляции секреции инсулина при 25 сахарном диабете
2. Имидазолиновые рецепторы и их роль в контроле секреции 26 инсулина
2.1. Характеризация имидазолиновых р- и 12-рецепторов
2.2. Имидазолиновые рецепторы в (3-клетках поджелудочной 31 железы: эффекты имидазолиновых соединений на секрецию инсулина
3. Метаболизм и биологическая активность ИнФ6
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Выделение островков Лангерганса и приготовление препаратов 42 ß-клеток
2. Культивирование секретирующих инсулин HIT Т15 клеток
3. Перфузия изолированной поджелудочной железы крысы
4. Измерение секреции инсулина в островках Лангерганса и HIT 44 Т15 клетках
5. Электрофизиология: измерение проводимости единичных 45 ионных каналов на плазматической мембране ß-клеток поджелудочной железы
6. Измерение концентрации ионов кальция внутри клетки при 47 помощи Са2+-чувствительных флуоресцентных зондов
7. Приготовление пермеабилизованных клеток и измерение 49 секреции инсулина в них
8. Фосфорилирование белков в препаратах HIT Т15 клеток
9. Измерение активности протеинкиназ в препаратах островков 51 Лангерганса или секретирующих инсулин HIT Т15 клетках
10. Аналитические методы иследования
10.1. Радиоиммунный анализ
10.2. Электрофорез в полиакриламидном геле и авторадиография
10.3 Определение белка
10.4. Статистическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Исследование эффектов имидазолинового соединения RX871024 на секрецию гормонов поджелудочной железы: инсулина, глюкагона и соматостатина in situ
2. Стимулирование секреции инсулина имидазолиновым соединением RX871024 in vitro
3. Исследование роли осг-адреноцепторов и Iг, Ь- имидазолиновых рецепторов в инсулинотропной активности имидазолиновых соединений в р-клетках поджелудочной железы
4. Влияние имидазолинового соединения RX871024 на внутриклеточную концентрацию ионов кальция ([Ca2+]J
5. Изучение влияния RX871024 на мембранный потенциал и активность ионных каналов в р-клетках поджелудочной железы
6. Исследование независимого от блокировки К+-каналов влияния RX871024 на экзоцитоз инсулиновых гранул
7. Выяснение роли фосфорилирования в развитии эффектов имидазолинов в р-клетках поджелудочной железы
8. Взаимодействие между классическими антидиабетическим препаратом, глибенкпамидом, и имидазолиновым соединением, RX871024, в стимуляции секреции инсулина
9. Сравнение эффектов имидазолина RX871024 на секрецию инсулина и [Ca2+]i в островках Лангерганса из нормальных и диабетических крыс
10. Изучение влияния ИнФ6и ИнФ5 на экзоцитоз инсулина. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ

Спектр возбуждения фуры-2 зависит от концентрации Са2+: увеличение Са2+ приводит к сдвигу спектра возбуждения в область более коротких волн.
Измерение [Ca2+]j производили в отдельных островках Лангерганса и отдельных (3-клетках. Предметные стекла с культивируемыми на них клетками или островками Лангерганса инкубировались в среде КРБ в присутствии 3,3 мМ глюкозы и 2 мкМ фуры-2 в течение 30 минут. За это время флуоресцентный индикатор дифундировал и аккумулировался внутри клеток. Затем, предметные стекла с прикрепленными клетками помещались в открытую ячейку (островки Лангерганса крепились в этой ячейке при помощи микрорешетки). Поток среды КРБ пропускался через ячейку при помощи микронасоса со скоростью 0,3 мл/мин. Ячейка помещалась в штатив инверсионного микроскопа (Zeiss, Axiovert 35М) и термостатировалась при 37°С. Микроскоп был оснащен детектором, регистрирующим число фотонов, и подключен к флуориметру SPEX Fluorolog-2 CM1T11I. Свет двух длин волн 340 и 380 нМ генерировался монохроматорами и подавался на образцы клеток, находящихся на штативе микроскопа. Флуоресценция регистрировалась при длине волны 510 нМ. Измерения отношения значений флуоресценции при длинах волн 340 и 380 нМ производилась каждую секунду. Получаемый сигнал: F340/F380, соответствовал концентрации свободных ионов Са2+ (Grynkiewicz G. et al, 1985).
7. Приготовление пермеабилизованных клеток и измерение секреции инсулина в них.
Процесс пермеабилизации состоит в селективном перфорировании мембраны клетки (Knight and Scrutton, 1986). Препарат пермеабилизованных