Поли- и моноклональные антитела в анализе гуморального иммунного ответа, структуры и функциональных свойств иммуноглобулинов животных

• Автор: Верховский, Олег Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 280 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Иммунная система: основные понятия
2.2. Иммуноглобулины и гуморальный иммунный ответ:
теоретические основы
2.3. Развитие и совершенствование методов иммуноанализа на основе
поли- и моноклональных антител
2.4. Использование антител в клинической практике:
стратегия антительной терапии
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Выделение, очистка, идентификация иммуноглобулинов
и их фрагментов
4.1.1. Выделение и очистка 1§ хроматографическими методами
4.1.2. Идентификация иммуноглобулинов свиньи и собак
4.1.3. Выделение и идентификация тяжелых цепей
иммуноглобулинов
4.1.4. Выделение и идентификация Б(аЬ)2- и Бс- фрагментов иммуноглобулинов
4.2. Получение поли- и моноспецифических антисывороток
4.3. Получение моноклональных антител заданной специфичности
4.3.1. Иммунизация мышей и слияние клеток с помощью
полиэтиленгликоля
4.3.2. Скрининг гибридом на продукцию МкА

4.3.3. Клонирование гибридом
4.3.4. Перевод гибридом в массовую культуру и
получение асцитов
4.4. Иммунохимическая характеристика моноклональных антител
4.4.1. Определение изотипа моноклональных антител
4.4.2. Определение активности и специфичности
моноклональных антител
4.4.3. Определение эпитопной специфичности моноклональных
антител методом иммуноблоттинга
4.4.4. Анализ перекрестной специфичности
моноклональных антител
4.4.5. Очистка моноклональных антител из мышиных асцитов
и синтез иммунопероксидазных конъюгатов
4.5. Использование моноклональных антител в качестве иммунодиагностических реагентов
4.6. Эпитопное картирование у1-цепей 1цС1 свиньи
с помощью моноклональных антител
4.7. Оценка гуморального иммунного ответа и изотипического распределения антител к вирусу трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ВТГС) в секретах молочных желез
иммунных свиноматок
4.7.1. Количественное определение уровня иммуноглобулинов и специфических антител в секретах свиноматок
4.7.2. Анализ изотипического распределения антител к ВТГС
в секретах молочных желез иммунных свиноматок
4.7.2.1. Роль и его субизотипов в иммунном ответе к ВТГС
4.7.2.2. Значение эА иМ в иммунном ответе к ВТГС
4.7.2.3. Распределение Ig's (к) и (X) в иммунном ответе к ВТГС

4.8. Количественная характеристика иммуноглобулинов сыворотки крови собак при демодекозе и дерматитах

4.9. Разработка и использование методов иммуноанализа
для диагностики инфекционного гепатита плотоядных и анализ
соотношения титр вируса/титр специфических антител в сыворотках
крови спонтанно инфицированных собак
4.9.1. Разработка непрямого твердофазного ИФА для выявления антител кгексону САУ
4.9.2. Получение и иммунохимическая характеристика МкА к
структурным белкам САУ
4.9.3. Разработка «сэндвич»-ИФА на основе полученных поли-
и моноклональных антител для детекции гексона САУ
4.9.4. Определение и анализ соотношения титр вируса/титр специфических антител в сыворотках крови спонтанно инфицированных САУ-1 собак
5. ОБСУЖДЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
8. ПРИЛОЖЕНИЕ

Рис. 6. Распределение лимфоцитов в органах и тканях организма (по I. Ткагё, 1996).
Лимфоузлы 40%
ДРУгие ткани 25%
Кровь 2%
Кишечник 10%
Селезенка 10%
Костный мозг 10%
Антигенные рецепторы В-лимфоцитов представляют собой антитела, связанные с мембраной. Взаимодействие антигена с этими мембранными молекулами антител инициирует последовательную В- клеточную активацию, что приводит к развитию эффекторных клеток, активно секретирующих молекулы антител. Более подробно о В-лимоцитах изложено в следующем разделе.
2.1.5.2. Т- лимфоциты Вторым основным классом лимфоцитов являются Т-лимфоциты, предшественники которых возникают в костном мозге, а затем мигрируют и созревают в тимусе. В дальнейшем, Т-лимфоциты подразделяются на функционально различные популяции, главными из которых являются Т- хелперы (Тн) и цитотоксические (Тс или СТЪ) клетки. Очень важное значение для идентификации и анализа Т- клеток послужило открытие различных экспрессированных мембранных белков у функционально различных популяций. Эти белки являются фенотипическими маркерами различных популяций лимфоцитов (см. п.п. 2.1.4.1.) и играют важную роль в биологических функциях клеток. Т-лимфоциты играют ключевую роль в селективном распознавании иммуногенов и в активации антиген- специфических В лимфоцитов. Однако, в отличие от В- клеток, Т-клетки не могут распознавать растворимые белковые антигены в их нативной форме.