Кальций- и актинзависимое ингибирование синтеза белка в культуре клеток

• Автор: Шаров, Вадим Иванович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 131 с.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АДФ аденозиндифосфат
АТФ аденозинтрифосфат
БСА бычий сывороточный альбумин
ДМСО диметилсульфоксид
ДСН (SDS) додецил сульфата натрия
ДТТ дитиотреитол
J1C лошадиная сыворотка
мРНК матричная рибонуклеиновая кислота
мРНП рибонуклеопротеидные частицы мРНК
ПААГ полиакриламидный гель
протеинкиназа А цАМФ-зависимой протеинкиназа
протеинкиназа С кальций/фосфолипид-зависимая протеинкиназа
ТХУ трихлоруксусная кислота
ТСБ трис солевой буфер
ФДЭ фосфодиэстераза
ФКС эмбриональная (фетальная) сыворотка крупного
рогатого скота ФСБ (PBS) фосфатный солевой буфер
цАМФ циклоаденозинмонофосфат
ЭГТА (EGTA) этиленгликольтетрауксусная кислота
ЭДТА (EDTA) этилендиаминтетрауксусная кислота
СаМ кальмодулин
HEPES 1Ч-2-гидроксиэтилпиперазин-БГ-2-этансульфоновая
кислота (N-2-hydroxyethylpiperazine-N’-etane sulfonic acid) [Ca2+]m внутриклеточная концентрация свободного кальция
[Ca2+]out внеклеточная концентрация свободного кальция

Оглавление.
Список сокращений
I. Введение
II. Обзор литературы
1. Клеточный синтез белка
1.1. Изменения в синтезе белка по циклу и при дифференцировке
1.2. Регуляция трансляции мРНК
1.3. Регуляция синтеза прото-онкогенов и цитокинов
1.4. Гормон-зависимая регуляция синтеза белка и регуляция синтеза 17 белка во время оогенеза.
2. Роль кальция в проведении сигнала
2.1. Рост внутриклеточной концентрации кальция при разных стимулах
2.2. Регуляция кальциевого сигнала
2.3. Влияние кальция на синтез белка
3. Цитоскелет
3.1. Структуры цитоскелета
3.2. Связь элементов белок-синтезирующей системы с цитоскелетом
3.3. Кальций-зависимые изменения цитоскелета
3.4. Изменения цитоскелета в клеточном цикле
Заключение
III. Материалы и методы
1. Клеточные методы
2. Мечение клеточных белков
3. Электрофоретические методы
4. Иммуноблоттинг
5. Иммунофлюоресцентная микроскопия
6. Измерение уровня внутриклеточного кальция
7. Получение С2 токсина
IV. Результаты и их обсуждение
1. Разработка метода, позволяющего обнаружить кратковременные

изменения в синтезе белка
2. Повышение уровня внутриклеточного кальция после добавления 62 иономицина.
3. Иономицин вызывает кратковременное ингибирование синтеза 63 белка в покоящихся клетках PC 12.
4. Действие кальциевого антагониста - кобальта на синтез белка в 72 покоящихся клетках
5. Влияние ингибитора кальмодулина W7 на синтез белка
6. Влияние лития, ингибитора инозитольного обмена, на 78 ингибирующий эффект кальциевого ионофора
7. Зависимость синтеза белка от состояния актинового цитоскелета
7.1. С2 токсин
7.2. Обработка С2-токсином вызывает разборку актиновых 84 филаментов в эукариотических клетках
7.3. ADP-рибозилирование актина увеличивает пул его мономеров
8. Деполимеризация микрофиламентов приводит к ингибированию 87 синтеза актина
8.1. С2-токсин влияет на синтез небольшой группы белков в клетках

9. Изменения в общем синтезе белка, индуцированные С2 токсином
9.1. Посттранскрипционная регуляция экспрессии актина в клетках, 93 обработанных С2-токсином
10. Разрушение цитоскелетных структур при тепловом шоке
V. Заключение
VI. Выводы
VII. Список литературы
Благодарности

Известно, что фактор имеет два актин-связывающих домена и может учавствовать в формировании пучков актина. Связь eEFlA с цитоскелетом может быть важна для транспорта мРНК, поскольку фактор был обнаружен в составе частиц транспортируемых матриц (Barbarese et al, 1995).
Среди других факторов белкового синтеза повышенное сродство к цитоскелетной сети было продемонстрировано для специфического для растений фактора инициации eIF-(n3o)4F. Взимодействие р86 субъединицы eIF-(H30)4F кукурузы с микротрубочками регулировало динамику микротрубочек, влияя на их число и изменяя их среднюю длину (Hugdahl et al, 1995). Определенным сродством к актину обладает eEF2 (Shestakova et al., 1991; Bektas et al., 1994).
Взаимодействие аппарата белкового синтеза с цитоскелетом осуществляется, по-видимому, через посредство мРНК. Так РНКаза нарушает связь полисом с цитоскелетом (Lenk et al., 1977). С другой стороны, диссоциация полисом высокими концентрациями солей, нагреванием или ингибиторами инициации трансляции, такими как пактамицин (van Venrooij et al, 1981) или веррукарин (Fulton et al, 1980) не освобождали матрицы от цитоскелета. Для многих матричных РНК было показано, что за связывание ответственна определенная последовательность в З'-нетранслируемой области мРНК (Kislauskis & Singer, 1992; Kim-Ha et al., 1993; Macdonald et al, 1993; Grunert & Johnston, 1996). Такие последовательности обнаружены для мРНК протоонкогена c-myc (Hesketh-e/ al, 1994). Однако, существуют факты, говорящие о существовании не только мРНК-зависимого механизма компартментализации полисом на цитоскелете. Так, после мягкого