Иммуноферментный анализ естественных антител к катехоламинам и простагландинам

• Автор: Трубачева, Жанна Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 88 с. : ил.

Введение.
СОДЕРЖАНИЕ,

Список используемых сокращений
Глава 1. Обзор литературы
«ЕСТЕСТВЕННЫЕ АНТИТЕЛА К ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМ СОЕДИНЕНИЯМ»
1.1. Естественные антитела к макромолекулярным физиологически активным соединениям
1.1.1. Происхождение естественных антител, их связь с ауто- и индуцированными антителами
1.1.2. Иммунохимические свойства естественных антител
1.1.3. Физиологическая роль естественных антител
1.2. Естественные антитела к низкомолекулярным соединениям
1.2.1. Биосинтез естественных конъюгированных антигенов, содержащих
в качестве гаптенов простагландины, катехоламины и гистамин
1.2.2. Физиологическая роль естественных и аутоантител к низкомолекулярным соединениям
Глава 2. Материалы и методы исследований
2.1. Материалы исследования
2.2. Методы исследований
2.3. Синтез конъюгированных антигенов
2.3.1. Синтез конъюгированных антигенов на полимерной матрице
2.3.2. Синтез конъюгатов на белковом носителе
2.3.3. Синтез конъюгированного антигена простагландинаНг
2.4. Выделение и очистка Fab’ и Fc фрагментов иммуноглобулинов человека
2.5. Проведение реакции иммунопреципнтации
2.6. Измерение связывания простагландинаЕга с иммуноглобулином человека методом радиоиммунного анализа
2.6.1. Определение константы связывания простагландинаБга с
иммуноглобулином человека
2.7. Разработка ИФА для выявления естественных антител к

ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность проблемы.
Изучение естественных антител является актуальной задачей современной биохимии, особенно той ее части, в которой исследуются вопросы гуморального иммунитета. К настоящему времени обнаружено участие иммунных механизмов в патогенезе ряда сердечно-сосудистых и нервных заболеваний. Особое место занимает изучение у этой категории больных изменения факторов гуморального иммунитета, которое рассматривается как одна из причин, способная привести к развитию иммунорегуляторного дисбаланса.
Исследования последних лет показали, что важной составной частью циркулирующих иммуноглобулинов являются естественные антитела. Так были обнаружены естественные антитела к нуклеиновым кислотам, фосфолипидам большому числу белковых антигенов и ряду пептидных биорегуляторов. Показано, что при патологических состояниях происходит изменение нормального уровня естественных антител, которое как правило связано с нарушением метаболизма того или иного ключевого эндогенного соединения, участвующего в патогенезе заболевания.
Однако, на сегодняшний день имеется не много исследований, посвященных функционированию факторов гуморального иммунитета в норме, т. е. изучению нормальных иммуноглобулинов, физиологическая роль таких компонентов гуморального иммунитета остается пока, главным образом, предметом гипотез и дискуссий.
В данной работе была предпринята попытка выявления естественных антител к таким низкомолекулярным эндогенным соединениям, как катехоламины и простагландины , которые обладают высокой биологической активностью и являются универсальными медиаторами различных физиологических процессов.
Известно, что индуцированные иммунизацией антитела к эндогенным соединениям могут выступать в организме в роли специфических антагонистов. Возможно аналогичную роль могут выполнять и естественные антитела. Наличие корреляций между колебаниями их уровней, с одной стороны, и активацией или ослаблением физиологических процессов, опосредуемых антигенами, против которых эти антитела направлены, с другой, могло бы служить подтверждением высказанного предположения.

использованием самопишущего регистрирующего устройства и коллектора той же фирмы.
Номер фракции
Рисунок 3. Профиль хроматограммы выделения Fab’ и Fc фрагментов IgG, полученных после гидролиза папаином.
Было получено две фракции: первая содержала Fab’ фрагменты Ig, вторая - Fc. Обе фракции концентрировали и диализовапи против PBS. Идентификацию очищенных фрагментов осуществляли методом ИФА, используя антисыворотки против легких и против у-цепей IgG человека. Fc фрагменты не выявлялись антисывороткой против легких цепей, в то время как Fab’ фрагменты IgG преимущественно реагировали с антисывороткой против легких, и в меньшей степени, против у-цепей.
Из 9 мг исходного иммуноглобулина было выделено б мг Fab’ и I мг Fc фрагментов. Потеря определенной части Fc фрагментов происходила, вероятно, в результате их агрегации в процессе выделения.
2.5. Проведение реакции иммунопреципитации.
Реакцию иммунодиффузии в геле проводили по методу Оухтерлони (77), Суспензию 1%-ного агара в PBS расплавляли на кипящей водяной бане, затем разливали