Изучение свойств глутаматных рецепторов АМПА-типа мозга крысы на модели эпилепсии, вызванной имплантацией кобальта

• Автор: Гранстрем, Олег Константинович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 145 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ:
ВВЕДЕНИЕ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1 ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ГЛУТАМАТНЫХ РЕЦЕПТОРОВ И ИХ ФУНКЦИИ В ЦНС
1.1. Свойства семейства глутаматных рецепторов и их роль в ЦНС
1.2. Классификация глутаматных рецепторов
1.3. Молекулярная организация глутаматных рецепторов
1.4. Распределение и локализация глутаматных рецепторов в ткани мозга
1.5. Функциональная роль глутаматных рецепторов в мозге Глава 2 РОЛЬ ГЛУТАМАТНЫХ РЕЦЕПТОРОВ В
ПАТОГЕНЕЗЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЦНС
2.1. Роль глутаматных рецепторов в эпилептогенезе
2.2. Участие глутаматных рецепторов в развитии ишемии, алкоголизма, шизофрении, и болезни Альцгеймера
2.3. Экспериментальные модели эпилепсий у животных
2.4. Изменение экспрессии генов ОІиКя при эпилепсии
2.5. Особенности ЭКоГ при эпилепсии
Глава 3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Характеристика модельных животных

3.2. Выделение синаптических мембран из мозга крыс
3.3. Выделение ГМБ из синаптических мембран мозга крыс
3.3.1. Солюбилизация мембранных белков
3.3.2. Аффинная хроматография ГМБ на глутамат-сефарозе
3.3.3. Выделение субъединиц АМРА рецептора методом 50 препаративного электрофореза
3.4. Аналитический электрофорез
3.4.1. Электрофорез в денатурирующих условиях
3.4.2. Окраска гелей при помощи Кумасси R
3.4.3. Окраска гелей серебром
3.4.4. Аналитический электрофорез ДНК
3.5. Техника выполнения Вестерн блота
3.5.1. Перенос белков на нитроцеллюлозную мембрану
3.5.2. Выявление фракций белка с использованием специфичных 57 антител после электропереноса на нитроцеллюлозную мембрану
3.6. Техника выполнения ДОТ блота
3.6.1. Перенос белков и пептидов на нитроцеллюлозную мембрану
3.7. ELISA, .- ;

3.8. Определение специфического связывания [ Н] АМРА с фракциями 59 GluRs
3.9. Определение концентрации белка в растворе

3.10.Выделение тотальной мРНК из мозга крыс
3.10.1 .Очистка препарата мРНК от примесей ДНК
3.11. Методика проведения прямой КТ-РСЛ
3.12. Количественный анализ продуктов ЯТ-РСК
3.13. Иммуноцитохимическое окрашивание
3.13.1. Предварительная подготовка ткани
3.13.2. Приготовление и окрашивание срезов
3.14. Имплантация кобальта и регистрация ЭКоГ
3.15. Методы статистического анализа результатов исследования
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Глава 4 ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИИ СУБЪЕДИНИЦ АМРА РЕЦЕПТОРА '
4.1 Выделение глутаматсвязывающих мембранных белков и
субъединиц АМРА рецептора из мозга крысы
4.2. Идентификация субъединиц АМРА рецептора
4.3. Сравнение иммунологических свойств субъединицы 01иШ из
мозга крысы и синтетического И-концевого пептида- фрагмента СІиШ Глава 5 РАСПРЕДЕЛЕНИЕ, ИММУНОРЕАКТИВНОСТЬ И
ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ СУБЪЕДИНИЦ АМРА РЕЦЕПТОРА В КОРЕ И ГИППОКАМПЕ КРЫС С ЭПИЛЕПСИЕЙ, ВЫЗВАННОЙ ИМПЛАНТАЦИЕЙ КОБАЛЬТА

2.2. Участие глутаматных рецепторов в развитии ишемии, алкоголизма, шизофрении и болезни Альцгеймера
Важно отметить, что глутаматные рецепторы оказываются задействованными не только в развитии эпилепсии, но и в патогенезе других хронических заболеваний ЦНС. Так, известно, что опосредованный избыточным высвобождением глутамата вход кальция в клетку через NMDA рецепторы является одним из основных механизмов, приводящих к обширным нейродегенеративным изменениям при ишемии (Ikonomidou et. al, 1995, Michaelis, 1997).
При алкоголизме отмечается гиперпродукция NMDA рецепторов и связанное с этим увеличение чувствительности к глутамату. Увеличение экспрессии NMDA рецепторов можно' объяснить блокирующим действием алкоголя на модуляторный глициновый сайт, и последующим компенсаторным увеличением экспрессии рецептора. При резкой отмене алкоголя развивается глутаматергическое гипервозбуждение, которым можно объяснить развитие судорог, делирия и синдрома Корсакова (Tsai et al., 1995).
Специалистами активно обсуждаются возможные эффекты гипофункции NMDA рецепторов в патогенезе шизофрении. Блокаторы NMDA рецепторов,

такие, как кетамин и другие, способны вызывать у человека состояния близкие к острому шизоидному психозу, а у крыс провоцировать нейродегенеративные кортиколимбические изменения (Olney et al., 1995).