Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Захарова, Наталья Владимировна
03.00.04
Кандидатская
2000
Москва
140 с.
Стоимость:
499 руб.
СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Структура протон-транслоцирующих
NADH:xинoн оксидоредуктаз
1.1 Субъединицы 10 Субъединичный состав митохондриальных
и бактериальных ферментов Субкомплексы
Ассоциация субъединиц в процессе сборки
Комплекса I
Происхождение субъединиц и эволюция
Комплекса I
МАБН-дегидрогеназы, нетранслоцирующие
протоны
1.2 Редокс компоненты
Железо-серные центры
Хиноны
2. Каталитические свойства митохондриальной
БШубихинон оксидоредуктазы
2.1 Препараты ЫАОН-дегидрогеназы
Комплекс I
РР
2.2 Реакции, катализируемые Комплексом I
ЫАБН-оксидазная реакция
- Дыхательный контроль
- Обратимая деактивация Комплекса I
Обратный перенос электронов
Окисление ИАПН искусственными акцепторами
электронов
- Аналоги и гомологи убихинона
- Феррицианид и гексаминорутений
Генерация супероксид аниона
Трансгидрогеназная реакция
- Комплекс I
- Н+-трансгидрогеназа
2.3 Транслокация протонов
2.4 Ингибиторы Комплекса I
Ингибиторы центров связывания нуклеотидов
и начальных этапов переноса электронов
- МАИ1’, ЫАБН, АПР-рибоза и их производные
- Рейн
- Тинопалы
Ингибиторы восстановления хинонов
- Ротенон
- Пиерицидин А
- Ацетогенины
- Антибиотики миксобактерий
- Другие ингибиторы
3. Активный центр NADH:yбиxинoн оксидоредуктазы
3.1 Центры связывания нуклеотидов
Субъединица 51 кДа
Субъединица 39 кДа
Субъединицы, метящиеся фотоаффинными
аналогами нуклеотидов
3.2 Участие центров связывания нуклеотидов
в реакциях Комплекса I
Указания на работу не менее двух центров
связывания нуклеотидов
Подходы к определению количества
субстрат-связывающих мест
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Препаративные методы
1.1 Выделение митохондрий из сердца быка
1.2 Получение субмитохондриальных частиц (СМЧ)
1.3 Выделение 1УА13Н:убихинон оксидоредуктазы
из митохондрий
Промывание митохондрий
Получение препарата 81 (Комплексы I, II и III)
Получение препарата ЯдВ (Комплексы I и III)
Выделение ЧАОНубихинон оксидоредуктазы
1.4 Фракционирование Комплекса I, выделение
трехсубъединичного флавопротеина ДР)
1.5 Обработка СМЧ трипсином
1.6 Сопряжение СМЧ олигомицином
1.7 Получение АРАБН
2. Аналитические методы
2.1 Реакции, катализируемые препаратами
ПАБН-дегидрогеназы
НАЭН-оксидазная реакция, дыхательный контроль (ДК)
Сукцинат-зависимый обратный перенос электронов
DD трансгидрогеназная реакция
2.2 Определение концентрации APAD+ и NAD+
2.3 Преинкубация Комплекса I с NADH
2.4 Экстракция нуклеотидов
Экстракция NAD+ и флавинов хлорной кислотой
Экстракция флавинов трихлоруксусной кислотой (ТХУ)
Щелочная экстракция NADH
2.5 Регистрация Дцн+
2.6 Кинетическое определение механизма
бисубстратной реакции
Тройной комплекс и двойное замещение
Последовательность взаимодействия субстратов с ферментом в реакциях, протекающих с
образованием тройного комплекса
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. NADH:v6hxhhoh оксидоредуктаза и DD
трансгидрогеназная активность СМЧ
2. Кинетический механизм DD трансгидрогеназной реакции, катализируемой NADH:y6axHHOH оксидоредуктазой
2.1 СМЧ
NADH->APAD+ реакция
APADH->NAD+ реакция
2.2 Комплекс I
2.3 FP
2.4 Содержание связанных нуклеотидов в составе Комплекса I
3. Окисление и восстановление нуклеотидов в
реакциях прямого и обратного переноса
электронов, катализируемых Комплексом I
4. Влияние обратимых ингибиторов активного центра
Комплекса I на DD трансгидрогеназную реакцию
4.1 ADP-рибоза
4.2 Рейн
4.3 NAD+
4.4 Тинопалы (AMS-GX, 5BM-GX) 95 Влияние тинопалов на спектры поглощения
NADH и APADH
Влияние AMS-GX и 5BM-GX на DD реакцию
Комплекса I
5. DD трансгидрогеназная реакция 1 и Ацн+
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
как от ЫАОН (ББ реакция), так и от 1ЧАБРН (ТВ реакция) [34, 95, 197, 213], оптимумы pH для этих двух реакций составляют рН8.0 и рН5.5, соответственно. Реакция не происходит при использовании АР АВР4 (3-ацетил пиридин аденин динуклеотид фосфат) в качестве акцептора [95]. Механизм трансгидрогеназной реакции, катализируемой N А В Н: уб ихино н оксидоредуктазой не был исследован.
Н+-трансгидрогеназа. Во внутренней митохондриальной мембране есть еще один фермент, катализирующий трансгидрогеназную реакцию. Это протон-транслоцирующая никотинамид нуклеотид трансгидрогеназа (РГ-трансгидрогеназа, КФ 1.6.1.1.). Фермент катализирует прямой и стереоспецифичный перенос гидрид-иона между 4А позицией 19АВ(Н) и 4В позицией ИАВР(Н). Эта реакция сопряжена с переносом протонов через мембрану со стехиометрией Н71Т, близкой к единице [79, 102, 111, 126, 129, 148, 212, 272, 273, 275], она протекает по упорядоченному механизму с образованием тройного комплекса [61, 77, 91, 115, 119, 214, 243]. В обратной реакции происходит генерация Арн+- При энергизации мембраны, скорость прямой реакции возрастает в 10-12 раз, равновесие сдвигается в сторону образования ЫАВРН (Кщ = 500) [212]. Оптомумы pH прямой и обратной реакций составляют 7.5 и 6.5 соответственно.
Фермент из сердца быка - гомодимер [102, 273, 275]. Мономер (109 065 Да) состоит из трех доменов: I домен - И-концевой экстрамембранный участок (связывание 1МАВН и ИАВ*); II - центральный гидрофобный домен (транспорт протонов); III - С-концевой экстрамембранный домен (связывание ИАБРН и !;АВР'). Очищенный фермент и комплекс доменов I и III, присутствующие в перпаратах нативного Комплекса I, способны катализировать энерго-независимую реакцию [17, 85, 102, 148, 183, 212, 218, 274], ТТ и БВ обмены [14, 98, 102, 118, 185, 218, 236, 264, 281]. Однако, в отличие от Комплекса I, Н*-трансгидрогеназа может катализировать ВБ реакцию (стереоспецифичный 4А-»4А перенос гидрид
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Роль процессов свободного окисления дыхательных субстратов в метаболизации жирных кислот и защите от активных форм кислорода | Попов, Василий Николаевич | 2003 |
Методические аспекты определения среднемолекулярных пептидов крови и их изменение при сахарном диабете | Василенко, Дмитрий Викторович | 2004 |
Биохимические механизмы действия ганглиозидов как эндогенных адаптогенов в головном мозге крыс | Захарова, Ирина Олеговна | 2000 |