Биохимическая характеристика эффективности липосомных форм фенотерола

• Автор: Корякова, Анжела Григорьевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 140 с.

Оглавление

Введение
Список сокращений
Глава 1. Проблемы и перспективы использования липосом для направленного транспорта лекарств к органам дыхания
1.1 .Строение липосом и способы их получения
1.2.Применение липосом в пульмонологии
1.3.Взаимодействие липосом с клетками-мишенями дыхательных путей
1.4. Состав и молекулярные взаимодействия сурфактантной системы
легких
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Получение липосомной формы фенотерола
2.2. Экспериментальные модели и биологические объекты
2.3. Исследование острой токсичности липосомного фенотерола
2.4. Ингаляционное введение препаратов животным с экспериментальной моделью бронхообструкции
2.5. Выделение БР-А из биологических объектов
2.6. Биохимические исследования
2.7. Биофизические исследования
2.8. Морфологические исследования
2.9. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Биохимическая оценка эффективности липосомных форм фенотерола
3.1. Степень инкапсуляции фенотерола в липосомы и стабильность его липосомных форм
3.2. Острая токсичность липосомной формы фенотерола
3.3.Биохимическое исследование БАС крыс с экспериментальной моделью бронхообструкции до и после воздействия липосомных форм фенотерола

3.4. Влияние фенотерола и липосомных препаратов на активность NOS мышиной миеломоноцитарной линии клеток «Wehi-3»
Глава 4. Влияние липосомных форм фенотерола на состояние тучных клеток органов дыхания крыс с экспериментальной моделью бронхообструкции
4.1. Общая характеристика тучных клеток органов дыхания крыс в норме
и при экспериментальной БО
4.2. Состояние тучных клеток после воздействия фенотерола
4.3. Состояние тучных клеток после воздействия липосом из ЕРС и LPL
4.4. Состояние тучных клеток после воздействия липосомных форм фенотерола 7 5 Глава 5. Роль биофизических параметров липидного бислоя
в эффективности липосомных форм фенотерола
5.1. Фосфолипидный состав липосом и его связь с биофизическими параметрами липидного бислоя
5.2 Связь эффективности липосомных форм фенотерола в коррекции проявлений экспериментальной бронхообструкции с биофизическим состоянием липидного бислоя липосом
Глава 6. Роль сурфактантного белка А в векторной доставке липосомных форм фенотерола
6.1. Взаимодействие SP-A с липосомами
6.2. Влияние SP-A на эффективность действия липосомных форм фенотерола
Обсуждение
Выводы
Литература
Приложение

ВВЕДЕНИЕ
Успешное применение лекарств для лечения или предотвращения заболеваний во многом зависит от их селективности. Вопрос доставки лекарственного препарата в место его действия без побочных эффектов на остальные органы до сих пор остается открытым. В настоящее время признано, что одним из универсальных носителей, увеличивающих эффективность лекарственных средств, снижающих их токсичность и системное действие, являются липосомы.
Исследования последних лет открывают перспективу использования липосомных аэрозолей для лечения болезней органов дыхания. Эпидемиологические сведения во многих странах об увеличении летальных исходов бронхиальной астмы в результате использования агонистов р2-адренорецепторов вызвали широкую дискуссию по поводу эффективности и безопасности антиастматических лекарственных средств. Использование липосомной формы ингаляционных |32-агонистов, возможно, окажется новым направлением в совершенствовании препаратов данного класса.
Создание наиболее оптимальной и стабильной липосомной формы препарата обеспечивает широкая возможность выбора величины, структуры и липидной композиции везикул. Специфичность липидного состава липосом в значительной степени определяет механизм и степень их связывания с клетками. В ряде работ отмечалось, что наибольший контакт липосом с клетками достигается при формировании липосом из фосфолипидов тканей-мишеней [55,57]. В связи с этим становится очевидной высокая аффинность липосом, полученных на основе фосфолипидов легкого теплокровных к клеткам бронхиального дерева, что позволит использовать их в качестве носителя бронхолитических препаратов.
Стратегия направленного транспорта липосом заставляет обратить внимание на типы соединений, способных служить векторами в доставке везикул к клеткам-мишеням. Одна из морфофункциональных особенностей дыхательных путей - наличие сурфактанта легких, главной белковой
В SP-A и SP-D три CRD в каждом тримере, в отличие от переплетенных коллагеновых доменов, являются независимыми структурными единицами, имеют идентичную конформацию и располагаются почти перпендикулярно (Т-образно) перешеечному отделу [210]. Расстояние между тремя углевод-связывающими сайтами каждого тримера CRD неодинаково в различных коллектинах. С функциональной точки зрения это определяет специфическое узнавание углеводов соответствующим коллектином. Все три связующих сайта в тримере ориентированы вдоль верхней горизонтали Т-образного CRD-перешеечного отдела, что способствует связыванию углеводов, выстроенных на больших поверхностях, таких как внешняя стенка бактерий или грибков [210].
SP-B - дисульфид-связанный гомодимер, состоящий из 2-х полипептидных цепей из 79 аминокислотных остатков, массой 15-21 кДа. Это катионный белок с чистым зарядом +6 при физиологических pH. Каждая полипептидная цепь димера содержит 3 дисульфидных мостика [147]. Вторичная структура SP-B представляет собой на 27-45% а-спираль и примерно на 22% (3-складчатый лист в зависимости от окружающей фазы (органические растворители, детергентные мицеллы, липидные би- или монослои [135]).
SP-C - правильный липопептид, содержащий ковалентно-связанные жирные ацильные цепи,- является самым гидрофобным полипептидом из известных белковых структур. Полипептидная цепь SP-C состоит из 33-35 аминокислотных остатков (молекулярная масса 8,7 кДа [134]. Структура SP-C имеет три важных особенности: протяженный участок между 13 и 28 позициями (поливалиновый регион), содержащий только алифатические остатки Val, Ley или iLey с ответвленными боковыми цепями, состоящими, главным образом из остатков Val; диосновную пару Lysll-Argl2; группу Рго4-пальмитоилированные Cys5-Cys6-Pro7. Эти особенности были обнаружены у 7 видов млекопитающих от мыши до человека, что свидетельствует о важности этих участков в функционировании SP-C.