Характеристика препаратов саркоплазматического ретикулума скелетных мышц сусликов Spermophilus undulatus

• Автор: Малышева, Анна Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 с. : ил

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
А23187 калыдамин (карбоксильный полиэфирный
антибиотик), кальциевый ионофор АДФ аденозиндифосфат
АТФ аденозинтрифосфат
АТФаза аденозинтрифосфатаза
БСА бычий сывороточный альбумин
ДДС-Na додецилсульфат натрия
ЛДГ лактатдегидрогеназа
ПК пируваткиназа
ПААТ полиакриламидный гель
СР саркоплазматический ретикулум
Трис трис(гидроксиметил)аминометан
ФЕП фосфоенолпируват
ЭГТА (этилендиокси)диэтилендинитрилотетрауксусная
кислота
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
DHPR дигидропиридиновый рецептор
DIDS 4,4’-диизотиоциано-2, 2’-стильбендисульфонат
СаМ KII Са/СаМ-зависимая протеинкиназа
MOPS морфолинопропансульфоновая кислота
PMSF фенилметансульфонилфторвд
RyR рианодиновый рецептор
ОГЛАВЛЕНИЕ
I. ВВЕДЕНИЕ
П. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
II. 1. Гибернация млекопитающих
11.2. Регуляция метаболизма млекопитающих при зимней спячке 10 П.З. Регуляция функциональной активности сердца и
скелетных мышц при гибернации.
1. Особенности метаболизма сердечной и скелетных
мышц при гибернации
2. Молекулярные механизмы сокращения сердца и
скелетных мышц
3. Адаптационные изменения сократительных белков
при гибернации
4. Адаптационные изменения метаболизма кальция в мышечных клетках при гибернации.
11.4. Основные белковые компоненты мембран
саркоплазматического ретикулума
1. Са-связывающие белки СР
2. Молекулярная организация и механизм функционирования Са-АТФазы СР
3. Регуляция активности Са-АТФазы и Са-каналов СР
П1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
П1.1. .Животные
Ш.2. Получение препаратов саркоплазматического ретикулума
Ш.З. Определение концентрации белка
Ш.4. Определение неорганического фосфора
Н1.5. Электрофорез в полиакриламидном геле
Ш.6. Определение активности Са-АТФазы в сопряженной системе 50 П1.7. Исследование свойств мембран саркоплазматического ретикулума при помощи флуоресцентных зондов
III. 8. Фосфорилирование препаратов СР скелетных мышц суслика эндогенными протинкиназами
1. Определение уровня включения фосфата в белки СР
скелетных мышц сусликов .
2. Авторадиография
Ш.8. Материалы
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
IV. 1. Сравнение активности Са-АТФазы и белкового состава мембран СР сусликов, крыс и кроликов
IV.2. Сравнение свойств мембран СР скелетных мышц сусликов,
крыс и кроликов при помощи флуоресцентных зондов
IV.3. Анализ сезонных изменений белкового состава мембран
СР скелетных мышц сусликов
IV.4. Анализ сезонных изменений активности Са-АТФазы
СР скелетных мышц сусликов
IV.5. Исследование свойств мембран СР сусликов
при помощи флуоресцентных зондов
IV.5. Исследование регуляции активности Са-АТФазы СР скелетных мышц сусликов эндогенными протеинкиназами
V. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
VI. ВЫВОДЫ
VII. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

быстрых скелетных мышцах, SERCA2a - в сердце, медленных скелетных и гладких мышцах, SERCA2b - в разных типах клеток (гладкие мышцы, мозг, почки) и SERCA3 - в клетках крови и во многих эпителиальных клетках (Möller et al., 1996).
Са-АТФаза СР образована 994 аминокислотными остатками, расположенных в мембране асимметрично: 70% аминокислотных остатков обращено в цитоплазму, 25% находится в мембране и 5% обращены внутрь CP (Toyoshima et al„ 1993). Согласно рентгеноструктурному анализу Са-АТФазы СР, проведенному с разрешением в 2,6Ä (Toyoshima et al., 2000), цитоплазматическая часть Са-АТФазы состоит из следующих доменов: N
(нуклеодитсвязывающего), Р (фосфорилируемого) и А (рис. 1). Центральную часть занимает Р-домен, который содержит фосфорилируемый остаток Asp 351. Этот домен состоит из двух частей: N-терминальной (приблизительно между Asp330 и Asp359), которая соединена с трансмембранной спиралью (М4) и С-терминальной (между Lys605 и Asp737), соединенной с трансмембранной спиралью (М5). Эти две части Р-домена, образованные семью слоями параллельных ß-струюур с восемью короткими спиралями, вместе формируют Россмановскую складку. Фосфорилируемый остаток Asp351 находится в С-концевой части центральной ß-структуры.
Нуклеотидсвязывающий домен (N-домен) - самый большой из трех цитоплазматических доменов, имеет молекулярную массу около 27 кДа. Этот домен сформирован остатками (Gln360 — Arg604), вставленными между двумя областями Р-домена. Он образован семью полосами антипараллельных ß-структур с двумя спиралями, которые объединяют эти ß-структуры в образование наподобие сэндвича (рис. 1). Домен А (также называемый ß-доменом) - самый маленький домен из трех цитоплазматических доменов, его молекулярная масса около