Рецепторы инсулина и инсулиноподобного фактора роста 1 (ИФР-1): сравнительное изучение в ряду моллюски, круглоротые, млекопитающие

• Автор: Чистякова, Оксана Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 113 с.

ВВЕДЕНИЕ
СОДЕРЖАНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. ИНСУЛИН И ИФР-1: СТРУКТУРА, РЕЦЕПТОРЫ, РОЛЬ В РЕГУЛЯЦИИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ФУНКЦИЙ У ВЫСШИХ ЖИВОТНЫХ
1.1.1. Инсулин
1.1.2. ИФР-1 и ИФР-связывающие белки
1.1.3. Рецепторы инсулина и ИФР-
1.1.4. Роль инсулина и ИФР-1 в регуляции физиологических функций
1.2. ИНСУЛИНОПОДОБНЫЕ ПЕПТИДЫ И ИХ РЕЦЕПТОРЫ
В ЭВОЛЮЦИИ
1.2.1. Одноклеточные эукариоты
1.2.2. Беспозвоночные
1.2.3. Позвоночные
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Экспериментальные животные
2.2. Получение гетерогенной фракции клеток головного мозга
2.3. Получение сарколеммальной фракции мышц ноги моллюска
2.4. Получение частично очищенных рецепторов
2.5. Определение специфического связывания |251-инсулина и |251-ИФР-1 .
2.6. Ковалентная сшивка 1251-инсулина и 12з1-ИФР-1 с рецепторами
2.7. Фосфорилирование частично очищенных рецепторов
2.8. Выявление белков, фосфорилированных по тирозину,
методом иммуноблоттинга
2.9. Электрофорез в ПААГ
2.10. Определение активности гликогенсинтетазы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕЦЕПТОРОВ К ПЕПТИДАМ ИНСУЛИНОВОГО СЕМЕЙСТВА В ТКАНЯХ МОЛЛЮСКА АЫОООША СУОША

3.1.1. Связывание 1 ъ1-инсулина и 12Т-ИФР-1 в мышцах ноги и
нервных ганглиях моллюска
3.1.2. Выявление белков, фосфорилированных по тирозину,
в сарколеммальной фракции мышц ноги моллюска
3.1.3. Обсуждение результатов
3.2. РЕЦЕПТОРЫ ИНСУЛИНА И ИФР-1 В ТКАНЯХ МИНОГИ
1.А МРЕТ К А РШУМШМ В СРАВНЕНИИ С РЕЦЕПТОРАМИ
В ТКАНЯХ КРЫСЫ
3.2.1. Рецепторы инсулина и ИФР-1 - связывание гомологичных и гетсрологичных пептидов
3.2.2. Субъединичный состав рецепторов инсулина и ИФР-1 миноги
3.2.3. Обсуждение результатов
3.3. РЕГУЛЯТОРАЯ РОЛЬ ИНСУЛИНА И ИФР-1 В СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦАХ МИНОГИ ЬА МРЕТ КА ПШМТИМ
В ПРЕДНЕРЕСТОВЫЙ ПЕРИОД
3.3.1. Связывание |251-инсулина и 1251-ИФР-1 в скелетных мышцах миноги
3.3.2. Влияние инсулина и ИФР-1 на активность гликогенсинтетазы
в скелетных мышцах миноги
3.3.3. Обсуждение результатов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
- антиинсулиновая сыворотка
- аденозинтрифосфат
- аденилатциклаза
- аденилатциклазная система
- бычий сывороточный альбумин
- гуаниндифосфат
- гормон роста
- гликогенсинтетаза
- гуанинтрифосфат
- дезоксирибонуклеиновая кислота
- дисукцинимидилсуберат
- дитиотреитол
- инсулиноподобные факторы роста
- инсулиноподобный фактор роста
- инсулиноподобный фактор роста
- равновесная константа диссоциации для гормонрецепторного комплекса
- константа ингибирования
- моллюсковые инсулиноподобные пептиды
- информационная (матричная) рибонуклеиновая кислота
- никотинамидаденининдинуклеотид
- никотинамидаденининдинуклеотид восстановленный
- полиакриламидный гель
- полиэтиленгликоль
- рибонуклеиновая кислота
- тирозинкиназная активность
- уридиндифосфат
- фактор роста фибробластов
- 35’-циклический аденозин-монофосфат
- центральная нервная система
- этилендиаминтетрауксусная кислота

беспозвоночных характеризуется высокой плейотропией. Инсулиноподобные пептиды беспозвоночных играют ключевую роль в регуляции роста, размера и числа клеток, репродуктивной функции, а также обеспечивают контроль за метаболизмом в условиях меняющейся доступности питательных субстратов. Последнее имеет отношение к вовлечённости инсулинового сигнального пути в регуляцию продолжительности жизни у некоторых видов. Наконец, обнаружение рецепторов данных пептидов в нейрональной ткани свидетельствует о нейротрансмитерной и нейромодуляторной роли инсулиноподобных пептидов у беспозвоночных.
Одним из нерешённых вопросов в эндокринологии беспозвоночных является вопрос о том, каким образом при наличии множества изоформ инсулиноподобных пептидов и только одного рецептора к инсулиноподобным пептидам осуществляется специфичность ответа. Предполагается несколько возможных объяснений: рецептор имеет более одного сайга связывания; рецептор взаимодействует с пептидами с разной аффинностью; экспрессия пептидов изменяется в зависимости от стадии развития. Также не исключается, что некоторые пептиды могут выступать в качестве антагонистов собственных рецепторов (Leevers, 2001).
1.2.3. Позвоночные
Инсулин и ИФР-1.
Инсулин обнаруживается у всех классов позвоночных, начиная с круглоротых (Emdin et al., 1977; Chan et al., 1981; Plisetskaya et al., 1988; Conlon et al., 1995 a, b; Conlon et al., 2001 b) - у рыб (Conlon et al., 1997 a; 1998; 1999; Kim et al., 2000; Anderson et al., 2002), амфибий (Conlon et al., 1997 c; 2000), рептилий (Conlon et al., 1997 b; Wang et al., 1999), птиц (Chevalier et al., 1996) и млекопитающих (Yu et al., 1990). Для ряда инсулинов определена структура генов. Данные сравнительного анализа показали, что на протяжении всей эволюции позвоночных эти гены, как и кодируемые ими пептиды, организованы принципиально одинаково (Conlon, 2001 а). Высокая консервативность характерна для аминокислотных остатков вовлеченных, в формирование «инсулинового фолдинга», а также ответственных за связывание с рецептором. Значительная дивергенция характерна для функционально менее значимых участков А- и В-цепей. Сравнение аминокислотных последовательностей показало, что в инсулинах позвоночных помимо шести цистеиновых инвариантных остатков только десять аминокислотных остатков являются консервативными в эволюции (GlyAl, IleA2, ValA3, Tyr А19, LeuB6, GlyB8, LeuBll, ValB12, GlyB23 и