Получение и характеристика комплексного препарата протеаз из поджелудочной железы кур

• Автор: Фиалко, Алла Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Краснодар
• Количество страниц: 144 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1 Препараты протеаз из поджелудочной железы
1.2 Характеристика панкреатических протеолитических ферментов
1.2.1 Трипсин
1.2.2 Химотрипсин
1.2.3 Эластаза
1.2.4 Коллагеназа
1.3 Протеазы поджелудочной железы человека
1.4 Протеолитические ферменты кур
1.5 Использование протеолитических ферментов в народном
хозяйстве
2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Определение концентрации белка
2.2 Высаливание, обессоливание, концентрирование
2.3 Определение активности ферментов
2.3.1 Определение активности ферментов по природным
субстратам
2.3.2 Определение активности ферментов по синтетическим субстратам
2.4 Разделение и очистка ферментов
2.4.1 Гель-хроматография
2.4.2 Ионообменная хроматография
2.4.3 Изоэлектрическое фокусирование
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Разработка способа определения активности эластазы по Н-трет-бутилоксикарбонил-аланин-р-нитрофениловому эфиру

3.2 Получение ферментных препаратов из поджелудочной железы
кур, свиней и крупного рогатого скота
3.2.1 Содержания ферментов в поджелудочной железе
3.2.2 Изучение условий экстракции
3.2.3 Активация проферментов поджелудочной железы кур
3.2.4 Высаливание протеолитических ферментов
3.2.3 Общая схема получения комплексного ферментного препарата
3.3 Сравнение препарата протеаз из поджелудочной железы кур с аналогичными свиней и крупного рогатого скота
3.3.1 Активность ферментов в полученных препаратах
3.3.2 Хроматографический анализ препаратов на сефадексе
3.3.3 Исследование ферментного состава препаратов методом изоэлектрофокусирования
3.3.4 Анализ препаратов ионообменной хроматографией
3.4 Сравнение лечебных свойств препарата из поджелудочной
железы кур с аналогичными крупного рогатого скота и свиней
3.4.1 Разработка условий применения препаратов при лечении
ожогов
3.4.2 Клиническая апробация препаратов при лечении ожогов
Выводы
Список литературы
Приложения
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АТАПНА- - М-ацетил-три -Е-аланин-р-нитроанилид
АТНА - М-ацетил-Е-тирозин - р-нитроанилид
АТЭЭ - КІ-ацетил-Е-тирозин этиловый эфир
АФПНА - 1Ч-ацетил-0,Е-фенилаланин-р-нитроанилид
БАПНА - М-бензоил-ОХ-аргинин-р-нитроанилид
БАЭЭ - ТБбензоил-Е-аргинин этиловый эфир
БОКАНФ - К-бутилоксикарбонил -Е-аланин-р-нитрофениловый эфир
ДДС-Ма - додецилсульфат натрия
ДПФ - диизопропилфторфосфат
ДЭАЭ- - диэтиламиноэтил-
КМ- - карбоксиметил-
МАС - молочно-ацетатная смесь
ПААГ - полиакриламидный гель
СИТ - соевый ингибитор трипсина
СТАПНА - К-сукцинил-три-Ь-аланин-р-нитроанилид
Т ЛХК - К-тозил-Ь-лизин хлорметилкетон
ТФХК - М-тозил-Б-фенилаланин хлорметилкетон
ТХУК - трихлоруксусная кислота
ФМСФ - фенилметилсульфонилфторид
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат

издавна применяются в качестве средств заместительной терапии при нарушении экзокринной функции пищеварительных желез (Вольф М., РансбергК., 1976). Для заместительной терапии при недостаточной секреции поджелудочной железы значение имеют протеазы, липазы и амилазы (Машковский М.Д., 1988). Эти ферменты входят в различные современные препараты: фестал, дегистал, панзинорм и многие другие.
Большой опыт применения протеолитических ферментов накоплен в хирургии. Обнаружение в лейкоцитах относительно больших количеств фермента типа трипсина, способного лизировать некротические ткани, явилось стимулом к использованию для подобных целей протеолитических ферментов поджелудочной железы. Метод энзимотерапии широко внедрялся благодаря всесторонним исследованиям группы ученых под руководством Стручкова В.И. (Даценко Б.М., 1995). Было показано, что местное применение протеиназ обеспечивает быстрое и безболезненное очищение ран, оказывает на ткани противовоспалительное и противоотечное действие, повышает их доступность воздействию антибактериальных препаратов, сокращает сроки лечения больных в 1,5-2 раза (Стручков В.И. и соавт., 1972, 1980).
В современной хирургической практике, при лечении гнойных ран и термических ожогов с наличием обширных девитализированных участков кожи и предлежащей к ней ткани используют различные некролитические средства. К ним прибегают в тех случаях, когда тотальная или тензинциальная некрэктомия не показана, а спонтанное и длительное отторжение некротических тканей нежелательно. Для этих целей используются химопсин, коллагеназа, трипсин, химотрипсин, аспираза, панкипсин, профизим, террилитин и др. Часто отмечаются недостатки этих препаратов, такие как узкий диапазон действия, невысокая протеолитическая активность, мелкая расфасовка и крайне ограниченный срок эффективного действия. Это создает ряд неудобств при их применении (Даценко Б.М. и соавт., 1985; Сторожук П.Г., Быков И.М., Павлюченко И.И., Быков М.И., 2001; Кузин М.И. и соавт., 1998; Машковский М.Д., 1996).