Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Хохлова, Ольга Владимировна
03.00.04
Кандидатская
2003
Пущино
110 с. : ил
Стоимость:
499 руб.
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. ОБЩИЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О СЕКРЕЦИИ БЕЖОВ
1.1. Транслокационный аппарат Л. coli
1.1.1. SecA - транслокационная АТРаза E. coli
1.1.2. Транслоказа SecYEGDFYajC
1.2. Модель Sec-зависимого секреторного пути
2. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ШАПЕРОНЫ И ИХ РОЛЬ В СЕКРЕЦИИ БЕЛКОВ..
2.1. Общее представление о шаперонах
2.2. Неспецифические шапероны E. coli
2.2.1. Белки DnaK/J, GrpE
2.2.2. Белки GroEL/ES
2.2.3. SRP
2.3. Экспорт-специфический шаперон SecB
2.3.1. Кристаллическая структура SecB
2.3.2. Взаимодействие SecB с пребелками
2.3.3. Взаимодействие шаперона SecB с транслокационной АТРазой SecA
2.3.4. Взаимодействие комплекса пребелок-SecB-SecA и белков транслокационного канала
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1.Материал ы
2.1.1. Бактериальные штаммы
2.1.2. Плазмиды
2.1.3. Среды и растворы
2.1.4. Реактивы
2.2.Метод ы
2.2.1 .Условия культивирования
2.2.2. Выделение плазмидной ДНК
2.2.3. Получение компетентных клеток E. coli и их трансформация
2.2.4. Определение активности щелочной фосфатазы
2.2.5. Анализ спектра изоформ щелочной фосфатазы
2.2.6. Субклеточное фракционирование
2.2.7. Определение скорости превращения предшественника щелочной фосфатазы в зрелую форму in vivo
2.2.8. Электрофорез белков
2.2.9. Иммуноблотинг
2.2.10. Иммунопреципитация
2.2.11. Определение концентрации белка
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Секреция щелочной фосфатазы зависит от присутствия в
клетках белка SecB
3.1.1. Зависимость секреции щелочной фосфатазы от SecB определяется температурой культивирования
3.1.2. Влияние SecB на секрецию зависит от источника углерода для роста клеток
3.1.3. Секреция щелочной фосфатазы, но не синтез и посттрансляционная модификация зависит от присутствия SecB
3.2. Секреция щелочной фосфатазы зависит от активности Sec А и эта
зависимость определяется наличием в клетке SecB
3.3. Белки SecB и SecA взаимодействуют с экспорт-инициирующим
доменом зрелой части щелочной фосфатазы
3.3.1. Влияние SecB и SecA на секрецию щелочной фосфатазы определяется первичной структурой экспорт-инициирующего домена
3.3.2. Содержание белков SecB и SecA в клетках E. coli не зависит от уровня секреции щелочной фосфтазы, определяемого первичной структурой экспорт-инициирующего домена
3.3.3. Содержание цитоплазматических факторов секреции в иммунопреципитате предшественника щелочной фосфатазы зависит от первичной структуры его экспорт-
инициирующего домена
3.4. N-концевая область сигнального пептида не участвует во
взаимодействии с белками SecB и SecA, но делит с ними функцию таргетинга npePhoA к мембране
3.4.1. Смена заряда N-концевой области сигнального пептида снижает секрецию щелочной фосфатазы в зависимости от содержания в клетках белка SecB
3.4.2. Влияние смены заряда N-концевой области сигнального пептида на секрецию щелочной фосфатазы зависит от активности белка SecA
3.4.3. Смена заряда N-концевой области сигнального пептида увеличивает зависимость секреции от SecB и SecA, и не влияет на их содержание в иммунопреципитате PhoA
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
Спираль cd состоит из восьми витков и располагается по диагонали под ß-листом. Поскольку ß-лист имеет типичное левостороннее вращение, он оборачивается вокруг спирали. Такое расположение этих двух структурных элементов образует гидрофобный кор молекулы. Спираль а2 соединяется со спиралью а1 при помощи петли длиной 11 аминокислотных остатков. Эта петля имеет вытянутую конформацию и преимущественно гидрофобная; это одна из наиболее консервативных областей SecB. Эта петля вместе с тяжем ß2 и петлей, соединяющей тяжи ßl и ß2, образует гидрофобный желоб на поверхности молекулы. Длина спирали а2 варьирует у разных субъединиц (от трех витков у субъединицы D до шести - у субъединицы В). После третьего витка эта спираль не упакована в молекулу, а располагается подвижно в растворе. Исследования с помощью протонной ЯМР-спектроскопии подтвердили, что С-концевой участок SecB E. coli длиной 13 аминокислотных остатков выступает наружу и очень подвижен (Volkert et al., 1999).
Два мономера SecB объединяются в димер в основном с помощью ßl-нити и а 1-спирали каждого мономера (рис. 5Б). Стабилизация димера происходит, прежде всего, с помощью водородных связей между двумя антипараллельными ßl-тяжами. В результате этого на поверхности димера образуется восьми-нитевой антипараллельный ß-лист. Два димера формируют тетрамер с помощью четырех а!-спиралей, расположенных между ß-листами. (рис. 5В). По форме тетрамер представляет собой прямоугольник с перетяжкой в месте, где соединяются два димера.
Биохимические, биофизические и генетические исследования структуры SecB подтвердили данные по кристаллической структуре. Так, например, введение одиночных аминокислотных замен Пе84 и Glu86 не влияет на образование тетрамера (Kimsey et al., 1995; Muren et al., 1999). Эти остатки локализованы на ß4-тяжax, но их боковые группы направлены в сторону от поверхности контакта димеров. В противоположность этому, введение одиночных аминокислотных замен Cys76, Val78 или Gln80 в SecB приводит к
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Структурно-функциональная характеристика гаптоглобина овец | Бейсембаева, Роза Ултубаевна | 1984 |
Биохимическая характеристика эффективности липосомных форм фенотерола | Корякова, Анжела Григорьевна | 2000 |
Новые аспекты локализации и регуляции содержания люлиберина в гипоталамусе и висцеральных органах крысы | Цибезов, Валерий Владимирович | 1985 |