О-гликозилгидролазы морских мицелиальных грибов

• Автор: Бурцева, Юлия Валериевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 137 с.

Благодарности. Выражаю искреннюю благодарность моим научным руководителям кандидату химических наук Виктории Васильевне Сова и доктору химических наук Татьяне Николаевне Звягинцевой за неоценимую помощь на всех этапах выполнения и написания данной работы.
Я признательна также Н.М. Шевченко, С.П. Ермаковой, Е.В. Сундуковой, М.И. Кусайкину и другим сотрудникам лаборатории химии ферментов за участие в исследовании и заинтересованное отношение к работе.
11е в меньшей степени я благодарна сотрудникам ТИБОХ ДВО РАН:
М.В. Пивкину, В.Е. Васьковскому, Н.М. Шепетовой, И.А. Горшковой, Т.Н. Макарьевой, Н.И. Белогорцевой, Г.А. Набережных, В.А. Бабко, B.C. Левину и Е.Л. Назаренко за помощь на отдельных этапах работы.
СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Распространение 1,3-р-О-глюканаз, их роль в природе
2.2. Субстраты 1,3-Р-О-глюканаз
2.3. Представления о механизмах действия О-гликозилгидролаз
2.4. Классификация О-гликозилгидролаз
2.5. Сведения о структуре 1,3-р-О-глюканаз
2.6.1,3-Р-О-Глюканазы грибов
2.6.1. Морские грибы как продуценты ферментов
2.6.2. Локализация глюканаз в грибах и их роль в образовании
клеточной стенки
2.6.3. Культивирование грибов, выделение и очистка 1,3-Р-О-глюканаз
2.6.4. Свойства 1,3-Р-О-глюканаз грибов
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Объекты исследования
3.2. Реагенты
3.3. Аналитические методы
3.4. Определение активности О-гликозилгидролаз
3.5. Выделение и очистка 1,3-р-О-глюканаз
3.5.1.1,3-р-О-Глюканаза СИае^тшт тсНсит
3.5.2. 1,3-р-О-Глюканаза Тг1сИос1егта аигеут1с1е
3.6. Исследования свойств
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Распространение О-гликозилгидролаз в морских мицелиальных
грибах
4.2. Влияние источника углерода в питательной среде на синтез
1,3-Р-О-глюканазы морским грибом СИ. тсНсит
4.3. 1,3-Р-О-Глюкапаза морского гриба СИ. тсНсит
4.3.1. Выделение и очистка фермента
4.3.2. Свойства 1,3-Р-0-глюканазы СИ. тсИсит
4.4. 1,3-Р-О-глюканаза морского гриба Т. аигеу1г1с1е
4.4.1. Выделение и очистка фермента
4.4.2. Свойства 1,3-р-0-глюканаз Т. аигечтИе
4.5. Сравнение свойств 1,3-р-О-глюканаз СИ. тсИсит и Т. аигеч1г1(1е.
Сравнительная оценка трансгликозилирующей активности
1,3-Р-О-глюканаз морских и наземных организмов
4.6. Регуляция активности и состава О-гликозилгидролаз в морских
и наземных организмах под действием различных факторов
4.6.1. Влияние метаболитов морских грибов на активность О-гликозилгидролаз морских моллюсков
4.6.2. Влияние белкового ингибитора 1,3-р-0-глюканаз морских моллюсков, выделенного из бурой водоросли Ь. сПИогШИея, на синтез О-гликозилгидролаз морскими грибами
4.6.3. Влияние вируса мозаики сои на активность О-гликозилгидролаз в листьях сои разных по устойчивости сортов
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ферментам морских грибов (Grant, Rhodes, 1992; Raghukumar et ah, 1994; Grant et al., 1996; Pointing et al., 1998; Pointing et al., 1999; Lee, 2000).
Наибольшее внимание уделяется целлюлозолитической активности морских грибов. Проводятся работы по изучению распространенности ферментов, разрушающих древесину, среди аско- , базидио- и дейтеромицетов (Molitoris, Schaumarm, 1986; Rohrmann, Molitoris, 1992), более детально исследуются свойства целлюлаз отдельных штаммов (MacDonald, Speedie, 1982). По 1,3-Р-Б-глюканазам морских грибов имеются лишь отдельные сведения. Так, например, Шауманом (Schaumann et al., 1986) при исследовании 37 штаммов морских грибов было показано, что 1,3-Р-0-глюканазы присутствуют в 71 % штаммов. Среди некоторых штаммов морских грибов, представленных в коллекции морских микроорганизмов (КММ ТИБОХ ДВО РАН), найдены продуценты И-ацетил-р-О-гексозаминидаз (Михейская и др., 1998; Zhuravleva et al., 2003), амилаз (Фролова и др., 2002), высокоактивных хитозаназ, хитиназ (Zhuravleva et al., 2001) и нуклеаз (Балабанова и др., 2001).
В работе Молиторис и Шаумана (Molitoris, Schaumann, 1986) приведены обобщенные данные о ферментах, участвующих в метаболизме морских грибов, и об их промышленном использовании (табл. 2). Из данных таблицы видно, что в морских грибах представлен широкий спектр ферментов, необходимых для жизнедеятельности организмов. Морские грибы могут быть биотехнологически важным источником О-гликозилгидролаз.
2.6.2. Локализация глюканаз в грибах и их роль в образовании клеточной стенки
Имеются немногочисленные сведения о локализации и регуляции синтеза ß-глюканаз у грибов, хотя именно эти данные способствуют пониманию функционального значения глюканаз и их роли в образовании клеточной стенки. Показано, что 1,3-р-В-глюканазы в препаратах Sclerotinia rolfsii находятся на кончике гифы, где происходит интенсивный синтез новой клеточной стенки (Kritzman et al., 1978). Для дрожжей S. cerevisiae проведено разделение субклеточных частиц, содержащих 1,3-р-0-глюканазы. Сделано предположение, что структуры, в которых локализованы ферменты, идентичны везикулам эндоплазматического ретикулума или везикулам аппарата Гольджи в клетках