Молекулярные механизмы активации орфановых рецепторов пятого подсемейства: биохимические и рентгеноструктурные исследования

• Автор: Крылова, Ирина Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 113 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. 1. Ядерные рецепторы и механизмы регуляции их активности
1. 1. 1. Суперссмейство ядерных рецепторов: биомедицинское значение,
филогения и номенклатура
^ 1.1.2. Роль состояния хроматина в активации транскрипции ядерными
рецепторами
1. 1. 3. Доменная структура ЯР
1. 1.4. Особенности связывания ЯР с гормоночувствительными
элементами
1.1.5. Лиганд-связывающий домен - мышеловка для лиганда
1. 1.6. Связывание корегуляторов и коактиваторный карман
1.1.7. Корегуляторы, отличные от коактиваторов и корепрессоров
1. 1.8. Регуляция активности орфановых рецепторов
^ 1.1.9. Альтернативные механизмы регуляции активности ядерных
рецепторов
1. 2. Орфановые рецепторы подсемейства ЫЛ5а: роль в развитии и
метаболизме и механизмы активации
1.2. 1. Роль орфановых рецепторов стероидогенного фактора 1 и гомолога
рецептора печени 1 в раннем развитии и метаболизме
1. 2. 2. Мутации в гене у человека
1. 2. 3. Роль 1ЛШ-1 в регуляции метаболизма холестерина
1. 2. 4. БЕ-1 и ЫШ-1: механизмы активации, в отсутствие лиганда
ф- 1. 2. 4. 1. Роль Оах-1 и БНР в регуляции активности БЕ-1 и 1ЖН-1
1. 2. 4. 2. Активация БЕ-1 и Б1Ш-1 через сигнальные пути
Заключение
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2. 1. Плазмиды
2. 2. Культура клеток
2. 3. Экспрессия и очистка белка
2. 4. In vitro трансляция, in vitro фосфорилирование, ограниченный
протеолиз и температурное плавление
2. 5. Моделирование вторичной структуры белков
2. 6. Аналитическое ультрацентрифугирование
2. 7. Кристаллизация лиганд-связывающего домена LRH-1, получение набора рамок диффракции и интеграция данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Влияние фосфорилирования SF-1 по сайту Ser203 на транскрипионную активность и конформацию SF-
3.1.1. Транскрипционная активность SF-1 зависит от фосфорилирования
по сайту Ser203 в шарнирном домене
3. 1.2. Erk-2 фосфорилирует SF-1 in vitro
3. 1. 3. Erk-2-зависимое фосфорилирование SF-1 повышает
взаимодействие с кофакторами in vivo
3. 1. 4. Фосфорилирование SF-1 с помощью Erk-2 вызывает
конформационное изменение в шарнирном домене
3. 1.5. Фосфорилирование SF-1 с помощью Erk-2 не имитирует действие
лиганда
3. 1.6. Эксперименты по температурному плавлению свидетельствуют в пользу активной конформации лиганд-связывающих доменов SF1 и LRH1... 66 3. 2. Структурные основы независимой от лиганда активности орфановых
рецепторов подсемейства NR5a
3. 2. 1. Получение рентгеносруктурной модели лиганд-связывающего
домена LRH-
3. 2. 2. Особенности структуры лиганд-связывающего домена LRH-1
3. 2. 3. LRH-1 содержит большой, но пустой лигандный карман
3. 2. 4. Спираль Н2 является интегральным стабилизирующим элементом, ответственным за активную конформацию лиганд-связывающего домена
3. 2. 5. Наружная поверхность спирали Н2 является специфической для
подсемейства ЫЯ5а поверхностью связывания корегуляторов
3. 2. 6. Особенности структуры и функции 1ЛШ-1Ю52Еи ЗИ- 1К255Ь
3. 2. 7. Архитектура коактиваторной бороздки Ы1Н-
3. 2. 8. Структурное объяснение мономерной природы 1ЛШ-
3. 3. 1Л1Н-1 и БЕ-1: пути регуляции контитутивной активности, в
отсутствие лиганда
3. 3. 1. Регуляция активности 1ЛШ-1 через киназные сигнальные пути
3.3.2. Домены белок-белкового взаимодействия за пределами лиганд-
связывающего домена: регуляторная роль шарнирного домена
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. 2. Орфановые рецепторы подсемейства N1*58: роль в развитии и метаболизме и механизмы активации
1. 2.1. Роль орфановых рецепторов стероидогениого фактора 1 и
гомолога рецептора печени 1 в раннем развитии и метаболизме
Подсемейство Б1г-Р1 ядерных рецепторов (КК5а) относится к эволюционно ранним подсемействам ЯР [11], с ортологами от С. до человека. Это
подсемейство включает орфановые рецепторы стероидогенный фактор 1 (8Б-1/ЫЯ5а1/А4ВР), гомолог рецептора печени 1 (ЬКН-1 /ЫК5а2/РТР/СРР), и фактор бивЫ 1агаги (Пг-Р1) дрозофилы. Рецепторы подсемейства >Ш5а всегда локализованы в ядре и связываются как мономеры с Б1г-Р1 гормоночувствительным элементом РуСААООРуСРи в промоторах контролируемых генов, к которым относятся многие гены, вовлеченные в онтогенез стероидогенных тканей и метаболизм холестерина [2]. Как было упомянуто ранее, рецепторы подсемейства N1^53 связываются с ДНК как мономеры, и 30 аминокислот С-концевого расширения, непосредственно примыкающих с ДНК-связывающему домену, образуют сигнатурный для данного подсемейства Р1г-Р1 бокс. Оба гена, 8К-./ и !ЯН-1, в результате альтернативного сплайсинга и использования альтернативных промоторов дают начало нескольким белковым изоформам, с характерной дифференциальной экспрессией в различных тканях и на разных стадиях развития [79,80]. В экспериментах по трансфекции культуры клеток млекопитающих, рецепторы подсемейства ЫЫ5а являются конститутивными активаторами и стимулируют транскрипцию репортеров в отсутствие лигандов. Было высказано предположение, что 25-гидроксихолестерин является лигандом для 8Б-1 [81], но это предположение не было подтверждено дальнейшими исследованиями [27,82].
Эксперименты по удалению генов продемонстрировали важную роль стероидогенного фактора 1 и гомолога рецептора печени 1 в раннем развитии.