Протеолитические ферменты и их ингибиторы в высших грибах

• Автор: Гзогян, Люсинэ Айказовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Краснодар
• Количество страниц: 111 с. : ил.

1. Обзор литературы
1.1 Протеолитические ферменты в растениях и их роль
1.2 Протеолитические ферменты в высших грибах, распространение
и их роль
1.3 Содержание и питательная ценность белков
в высших грибах
9 1.4 Ингибиторы протеолитических ферментов, свойства и
и распространение в растениях
1.4.1 Ингибиторы протеиназ из пасленовых
1.4.2 Ингибиторы протеиназ из злаковых
1.4.3 Ингибиторы протеиназ из тыквенных и других семейств
1.4.4 Белки - ингибиторы протеиназ в семенах
1.4.5 Роль ингибиторов протеолитических ферментов в растениях
1.5 Ингибиторы протеолитических ферментов в высших и

несовершенных грибах
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Определение количества белка
2.2.1 Определение активности ферментов по природным субстратам
2.2.2 Определение активности ферментов по синтетическим
субстратам
2.3 Определение ингибитора химотрипсина

2.4 Определение ингибитора трипсина
2.5 Определение активности по молоку цистеиновых и сериновых протеиназ
2.6 Методы изучения физико - химических свойств ферментов

3. РЕЗУЛЬАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Количество общего и растворимого белка в соке плодовых
тел базидиомицетов
3.2 Ингибиторы протеолитических ферментов
3.2.1 Ингибиторы трипсина
3.2.2 Ингибиторы химотрипсина
3.3 Активность протеолитических ферментов
3.3.1 Активность ферментов по синтетическим субстратам
3.3.2 Динамика изменения активности трипсиноподобных и химотрипсиноподобных ферментов при хранении
3.4 Активность протеолитических ферментов по природным
субстратам
3.4.1 Молокосвертывающая активность ферментов, действие ингибиторов, физико — химические свойства
3.4.2 Динамика изменения активности молокосвертывающих ферментов
* при хранении
3.4.3 Активность щелочных и кислых протеиназ и их свойства
3.4.4 Физико - химические свойства щелочных и кислых протеиназ
3.4.5 Протеолитические ферменты и их ингибиторы у вида
Amanita phalloïdes
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
♦ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Актуальность проблемы. Протеолитические ферменты выполняют разнообразные физиологические функции в живом организме, начиная с переваривания белков пищи и запасных белков семян до специфических регуляторных процессов, таких как активация зимогенов, образование гормонов и других физиологически активных пептидов из их предшественников, транспорт белков, защитные реакции. В связи с этим изучение механизмов регуляции активности протеолитических ферментов приобретает особую актуальность. Взаимодействие протеиназ с эндогенными белковыми ингибиторами является одним из главных и наиболее древним в эволюционном отношении механизмов регуляции активности протеиназ у живых организмов.
Процессы протеолиза у бактерий, растений и животных изучен достаточно широко и полно. Однако уровень знаний о протеолитических ферментах грибных организмов неравнозначен. Особое место среди мицелиальных грибов занимают базидиомицеты, которые сегодня по праву рассматриваются как перспективные продуценты белка кормового и пищевого достоинства (Бухало A.C., 1988). Дефицит животного сырья и несовершенство микробных препаратов - стимулировали интерес к базидиальным грибам как возможным продуцентам протеолитических ферментов ( Белова Н.В., 1992). Два обстоятельства оправдывают поиск ферментов пищевого и медицинского назначения среди высших базидиомицетов: наличие среди них большого числа съедобных грибов и отсутствие спороношения в культуре, что уменьшает опасность профессиональных заболеваний в условиях производства (Псурцева Н.В. с соавт., 1994).
Протеолитические ферменты применяются в пищевой, кожевенной, легкой, молочной промышленности. С увеличением выработки сыров

2.5 Определение активности по молоку цистеиновых и сериновых протеиназ
Поскольку молокосвертывающей активностью обладают и цистеиновьте и сериновые протеиназы угнетали специфическими ингибиторами для сериновых и цистеиновых. В одном и том же образце одновременно действовали специфическим ингибитором цистеиновых протеиназ - монойодуксусной кислотой и активирующей смесью, которая содержит 0,05 мкмолей цистеина, 0,02 м/молей этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), pH 6.2. В опытную пробирку наливали 0,25 мл пробы, 0,2 мл активирующей смеси и 0,25 мл раствора монойодуксусной кислоты. В контроле 1 вместо ингибитора добавляли 0,1 мл воды, а в контроле 2 0,3 мл. В качестве субстрата использовали молочно - ацетатную смесь (MAC). Если активность в контроле выше, чем в опыте, значит фермент ингибируются монойодуксусной кислотой и относятся к классу цистеиновых протеиназ (Sidney P., et al 1970).
На активность молокосвертывающих ферментов действовали специфическим ингибитором сериновых протеиназ
фенилметилсульфонилфторидом (ФМСФ) с концентрацией 0,3 мг/мл. В опытную пробирку наливали 0,25 мл раствора ФМСФ и 0,5 мл фосфатного буфера 0,02М pH 8,2. В контроле вместо ингибитора вода. В качестве субстрата также использовали молочно — ацетатную смесь. Если активность в опыте меньше, чем в контроле, значит происходило угнетение фенилметилсульфонилфторидом и ферменты относятся к классу сериновых протеиназ (Доссон Р., с соавт., 1989).