Биохимические аспекты индукции дифференцировки и апоптоза клеток линии К562

• Автор: Зыкина, Наталья Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Петрозаводск
• Количество страниц: 194 с. : ил.

Принятые сокращения
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Гетероциклические соединения в онкологии. Молекулярные механизмы
действия
1.2. Биохимические механизмы индукции дифференцировки клеток опухолевых линий
1.2.1. Дифференцировка клеток линии К562
1.2.2. Дифференцировка клеток других опухолевых линий
гематопоэтического происхождения
1.3. Биохимические механизмы индукции апоптоза клеток опухолевых линий
1.3.1. Индукторы, маркеры и пути реализации апоптоза в клетках линии К562
1.3.2. Индукторы, маркеры и пути реализации апоптоза в клетках других опухолевых линии гематопоэтического происхождения
1.4. Модуляция чувствительности клеток опухолевых линий к НЦТ-лизису ЕКК дифференцирующими агентами
Глава 2. Материалы и методы исследования
Глава 3. Результаты исследования
3.1. Биологическая активность //-оксидированных производных хинолина по отношению к клеткам К562
3.1.1. Влияние //-оксидированных производных хинолина
на пролиферацию и жизнеспособность клеток К562
3.1.2. Влияние //-оксидированных производных хинолина
на дифференцировку клеток К562 (определяемые маркеры: внутриклеточная концентрация гемоглобина, мембранные антигены - СО 14, С041)
3.1.3. Влияние //-оксидированных производных хинолина

на процессы апоптоза клеток К562 (определяемые маркеры: активность каспаз, внутриклеточная концентрация никотинамидных коферментов, характер повреждений
ДНК)
3.1.4. Влияние //-оксидированных производных хинолина на
чувствительность клеток К562 к НЦТ-лизису ЛПК человека
3.2. Биологическая активность //-оксидированных производных хинолина в комбинации с индукторами эритроидной дифференцировки
по отношению к клеткам К562
3.2.1. Влияние А^-оксидированных производных хинолина
в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на пролиферацию и жизнеспособность клеток К562
3.2.2. Влияние /^-оксидированных производных хинолина
в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на диффсренцировку клеток К562 (определяемые маркеры: внутриклеточная концентрация гемоглобина, мембранные антигены - СВ14, СВ41)
3.2.3. Влияние //-оксидированных производных хинолина
в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на процессы апоптоза клеток К562 (определяемые маркеры: активность каспаз, внутриклеточная концентрация никотинамидных коферментов, характер повреждений ДНК)
3.2.4. Влияние //-оксидированных производных хинолина
в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на чувствительность клеток К562 к НЦТ-лизису ЛПК человека
3.3. Биологическая активность А-оксидированных производных хинолина в комбинации с индукторами эритроидной дифференцировки
по отношению к клеткам К562Н$-р53
3.3.1. Влияние /^-оксидированных производных хинолина
в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО
на дифференцировку клеток К562Н$-р53 (определяемые
маркеры: внутриклеточная концентрация гемоглобина)
3.3.2. Влияние /^-оксидированных производных хинолина
в комбинации с тимидином, бутиратом натрия и ДМСО на процессы апоптоза клеток К562Н$-р53 (определяемые маркеры: активность каспаз, внутриклеточная концентрация никотинамидных коферментов, характер повреждений
ДНК)
3.4. Биологическая активность производных тиазофосфола по отношению к клеткам К562
3.4.1. Влияние производных тиазофосфола на пролиферацию
и жизнеспособность клеток К562
3.4.2. Влияние производных тиазофосфола на дифференцировку
клеток К562 (определяемые маркеры: внутриклеточная концентрация гемоглобина, активность б-аминолевулинат-синтетазы и гемоксигеназы, мембранные антигены - СО/4, СВ41)
3.4.3. Влияние производных тиазофосфола на процессы апоптоза
клеток К562 (определяемые маркеры: активность каспаз, внутриклеточная концентрация никотинамидных коферментов, характер повреждений ДНК)
3.4.4. Влияние производных тиазофосфола на чувствительность
клеток К562 к НЦТ-лизису ЛПК человека
Глава 4. Обсуждение результатов
Заключение
В ыводы
Список использованной литературы
Приложение

происходит взаимодействие с неактивной прокаспазой-8 (FL1CE). Образовавшийся комплекс называется DISC (сигнальный комплекс, индуцирующий смерть), в нём прокаспаза-8 самоактивируется и в свою очередь активирует каспазу-3. Помимо FADD сродством к fas-протеину обладает адаптерный фактор Daxx, он инициирует Е4 DD-нез ав и с и м ы й SARK/JNK/p38-uyTb, в котором активируются факторы транскрипции c-Jun. Активация рецепторов смерти приводит к определённым нарушениям работы различных частей клетки. Деградация 28S рРНК приводит к сбою в процессах синтеза белка и развёртыванию программы апоптоза (Nadano, Sato, 2000).
В зависимости от концентрации каспазы-8 в клетках различают два типа Fas-позитивных клеток. В клетках I типа содержится большое количество прокаспазы-8, которая активируется в составе DISC, запуская каспазный каскад независимо от митохондрий. В клетках II типа содержится малое количество каспазы-8, которая активируется с участием белка Bid, и приводит к развитию митохондриального пути апоптоза (Scaffidi et al., 1998).
Липидный путь апоптоза. Церамид является медиатором апоптоза в различных клетках. При взаимодействии кислой сфингомиелиназы (ASM - acid sphigomyelinase) с продуктами Fas-о п о сре до ван н о го апоптоза, происходит активация ферментов сфингомиелиназ, которые гидролизуют сфингомиелин с образованием церамида и фосфорилхолина (Алесенко и др., 1998; Levade, Jaffrezou, 1999). Церамид (А-ацил-сфингозин) активирует многие протеинкиназы, модифицирует белки ионных каналов, в частности К+-каналов, приводя к их инактивации, что необходимо для клетки, вовлечённой в апоптоз. Сфингомиелин может гидролизоваться под действием радиации, ультрафиолета и химических препаратов. Церамид запускает SAPKs/JNK-путь, активирует серин-треониновую фосфатазу (САРР), которая инактивирует Вс1-2 (Gulbins et al., 2000). Таким образом, церамид снижает отношение Bcl-2/Bax, увеличивает каспазную активность и апоптоз путём увеличения уровня клеточного р53 (Kim et al., 2002). Помимо этого, церамид вызывает транслокацию Вах в митохондрии, блокирует экспрессию антиапоптотического белка Bcl-XL, увеличивая отношение Bax/Bcl-Xi (Kim et al., 2001a). Показано, что церамид превращается в ганглиозид GD3, который индуцирует митохондриальные повреждения, в частности, потерю трансмембранного потенциала и фрагментацию ДНК (De Maria et al., 1997). Обработанные фитосфингозином клетки демонстрируют некоторые черты апоптоза,