Роль молекул оксида азота в программированной гибели нейтрофилов при окислительном стрессе

• Автор: Стариков, Юрий Витальевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 131 с. : 4 ил.

Оглавление
Список использованных сокращений
Введение
Глава 1. Современные представления о роли оксида азота в регуляции апоптоза (обзор литературы)
1.1. Образование оксида азота и внутриклеточные эффекты оксида азота
1.1.1. Физико-химические свойства молекулы оксида азота
1.1.2. Ж)-синтазы - ферменты синтеза оксида азота
1.1.3. Механизмы накопления молекулы оксида азота в клетке
1.1.4. Молекулярные механизмы реализации эффектов оксида азота
1.1.5. Механизмы утилизации молекулы оксида азота
1.2. Современные представления о молекулярных механизмах апоптоза
1.2.1. Роль белков семейства Вс1-2 в регуляции апоптоза
1.3. Молекулярные основы взаимодействия окислительного стресса и апоптоза
1.3.1. Влияние оксида азота на молекулярные механизмы реализации апоптоза
1.4. Роль апоптоза нейтрофилов в реализации воспаления: молекулярные механизмы в дизрегуляции программированной
гибели эффекторных клеток
Заключение
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Материал исследования
2.1.1. Экспериментальный блок исследования
2.1.2 Клинический блок исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение нейтрофилов крови
2.2.2. Культивирование нейтрофильных лейкоцитов крови
2.2.3. Метод индукции наработки оксида азота в нейтрофилах крови
2.2.4. Метод ингибирования продукции оксида азота в нейтрофилах крови
2.2.5. Оценка реализации апоптоза нейтрофилов крови методом проточной лазерной цитометрии
2.2.6. Оценка концентрации активных форм кислорода в нейтрофилах крови
2.2.7. Определение концентрации ионов кальция в цитоплазме нейтрофилов крови

2.2.8. Оценка продукции оксида азота нейтрофилами венозной крови
2.2.9. Определение содержания циклических нуклеотидов цАМФ и цГМФ в нейтрофилах венозной крови
2.2.10. Оценка уровня белков-регуляторов (Вс1-2, Вах) в нейтрофилах крови
2.3. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1. Особенности программированной гибели нейтрофилов крови при окислительном стрессе in vitro и остром
воспалении
3.2. Оценка влияния оксида азота на апоптоз нейтрофилов крови при окислительном стрессе in vitro и остром
воспалении
3.2.1. Влияние индукции и ингибирования синтеза оксида азота на содержание активных форм кислорода в нейтрофилах при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении
3.2.2. Изменение числа апоптотических нейтрофилов при; индукции и ингибировании синтеза NO в условиях
окислительного стресса in vitro и при остром
воспалении
3.2.3. Содержание метаболитов оксида азота в нейтрофилах крови при окислительном стрессе in vitro и „ остром воспалении в условиях воздействия L-аргинина и ,
L-NAME
3.3. Оценка молекулярных механизмов дизрегуляции апоптоза нейтрофилов крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении
3.3.1
3.3.2.Содержание ионов кальция в нейтрофилах крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении в условиях индукции и ингибирования синтеза оксида азота
3.3.3. Содержание белков-регуляторов апоптоза в нейтрофилах крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении
Глава 4. Обсуждение полученных результатов исследования
Выводы
Список литературы

Список использованных сокращений:
АДФ - аденозиндифосфат
АТФ - аденозинтрифосфат
АФК - активные формы кислорода
ГТФ - гуанозинтрифосфат
ДАТ - диацилглицерол
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДНКЖ - динитрозильные комплексы негемового железа
ДХФ-ДА - дихлорфлюоресцеин диацетат
ИФ-3 - инозитолтрифосфат
мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота
НАД - никотинамидадениндинуклеотид
ОВ - острое воспаление
ОС - окислительный стресс
СОД - супероксиддисмутаза
ФАД - флавинадениндинуклеотид
ФДЭ - фосфодиэстераза
ФИТЦ - флюоресцеинизотиоцианат
ФМН - флавинмононуклеотид
цАДФР - циклическая АДФ-рибоза
цАМФ - циклический аденозин - 3',5'-монофосфат
цГМФ - циклический гуанозин - 3',5'-монофосфат
еРГОБ - эндотелиальная конститутивная синтаза оксида азота
0-С8Р - гранулоцитарным колонийстимулирующий фактор
ОМ-СБР - гранулоцитарный / макрофагальный колонийстимулирующий
фактор
Вах - проапоптотический белок (ассоциированный с Вс1-2 белок X)
Вс1-2 - антиапоптотический белок (белок лейкемии В-клеток-2)
1Ь - интерлейкин

N08 - индуцибельная синтаза оксида азота

Активные формы кислорода имеют важнейшее значение в борьбе организма с микробами. Ведущую роль играют в этом фагоциты — гранулоциты и тканевые макрофаги [Simon H.U. et al., 1997; Dibbert В. et al., 1999]. Взаимодействие чужеродных частиц (опсонизированные бактерии, латекс) с поверхностью фагоцита вызывает активацию данных клеток, выражающуюся в перестройке метаболизма клетки - увеличении ионной проницаемости клеточной мембраны, усилении окисления глюкозы и резком возрастании (в десятки раз) потребления кислорода: при этом присоединение одного электрона к молекуле кислорода в основном состоянии приводит к образованию супероксидного анион-радикала. Это явление называют «дыхательным» или «респираторным взрывом» [Шепелев А.П. и соавт., 2000; Рябов Г.А. и соавт., 2002]. Дыхательный взрыв является основной причиной развития ОС в очаге воспаления.
Важным звеном врожденного иммунитета, формирующим первую линию защиты от инфекции, являются нейтрофилы. Ответ нейтрофилов на инфекционный агент заключается в их адгезии к эндотелию сосудистой стенки и направленной миграции в очаг воспаления (рис. 2). В результате инфекционный агент или поглощается эмигрирующими клетками, или разрушается АФК [Edwards S.W. et al., 2003; Маянский H.A., 2004]. Обычно мигрирующему нейтрофилу достаточно 3-12 мин, чтобы пройти эндотелий, а появление гранулоцитов в очаге может наблюдаться уже к 10-й мин от начала воспаления.