Разработка методов для неинвазивной диагностики рака предстательной железы

• Автор: Васильева, Евгения Борисовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 117 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Введение
1.2. Морфологические, гистологические и цитохимические аспекты патологических состояний предстательной
железы
1.3. Онкомаркеры рака предстательной железы
1.4. Роль системы глутатиона в регуляции опухолевого роста
1.5. Биологические свойства, структура и функции хепсина
1.6. Подходы к повышению эффективности диагностики и
прогнозирования РПЖ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Забор биологических образцов
2.2. Клеточные линии
2.3. Пробоподготовка
2.4. Определение метилирования промоторной области гена глутатион-S-трансферазы класса Р1
2.4.1. Реактивы
2.4.2. Выделение геномной ДНК
2.4.3. Метабисульфитная конверсия
2.4.4. ПЦР-амшшфикация
2.5. Определение активности белка хепсина в моче пациентов с хроническим простатитом, с подозрением на рак предстательной железы и здоровых доноров
2.5.1. Выбор клеточной линии в качестве положительного контроля
2.5.2. Определение концентрации белка в растворе
2.5.3. Определение активности хепсина в образцах мочи и
клетках линии ЬпСаР
2.5.3.1. Постановка реакции
2.5.3.2. Расчет активности фермента
6. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Определение метилированного статуса промоторного участка гена ёяф! в разных биологических жидкостях при различных патологиях предстательной железы
3.2. Подбор условий для исследования метилирования промоторной области гена
3.3. Оценка различных методов забора биоматериала для исследования метилирования промоторной области гена gstpl
3.4. Определение частоты метилирования промоторной области гена gstpl при различных патологических состояниях предстательной железы
3.5. Оценка диагностической точности метода мет-ПЦР при исследовании метилирования промоторной области гена gstpl
3.6. Разработка метода определения активности сериновой протеазы
хепсин
3.7. Анализ и оценка активности хепсина у больных с различными
патологиями предстательной железы
3.8. Определение предсказательной ценности положительного теста, предсказательной ценности отрицательного теста и диагностической точности метода измерения активности хепсина
Заключение
ВЫВОДЫ
Пример практической реализации полученных результатов
Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
5аР - 5а-редуктаза
ARE - андроген-зависимый элемент
DHT - дигидротестостерон
GSH - глутатион
GST -глутатион-Б-трансфераза
GSTP1 - глутатион-Б-трансфераза класса %
HGF - фактор роста гепатоцитов
HSP - белок теплового шока
ММП - мазриксные металлопротеиназы
SR domain - скевенджер-рецепторный домен
ТМ - трансмембранный домен
TNM - классификация, основанная на характеристике следующих параметров: T-tumor (опухоль), N - lymph node (лимфатический узел), М - metastasis (метастазы)
AR - андрогеновый рецептор
ДГПЖ - доброкачественная гиперплазия предстательной железы ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИГХ - иммуногистохимический анализ ПЖ — предстательная железа
ПИН простатическая интраэпителиальная неоплазия
ПСА - простатический специфический антиген
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РПЖ - рак предстательной железы
ТСП 2 - трансмембранная сериновая протеаза 2 типа

имеют критическое значение: они могут повлиять на лабильность субстрата и явиться причиной того, что со специфическим центром (S1) фермента свяжутся не те аминокислоты, которые были бы должны в норме. Полученные результаты дают основание предположить, что распознавание субстрата простатспецифическим антигеном связано не только со спецефической последовательностью аминокислот субстрата, взаимодействующей с активным центром фермента, но и со специфической аминокислотной последовательностью, взаимодействующей с 82-сайтом. Установление точной структуры специфического субстрата для ПСА позволит синтезировать ингибиторы ПСА. Специфические ингибиторы Г1СА, в свою очередь, позволят точно определить уровень ПСА на различных стадиях РПЖ и значение ПСА как при андроген-зависимом, так и при андроген-независимом раке, а также в нормальной ткани предстательной железы. Использование ингибиторов также позволит направленно доставлять в ткани предстательной железы иммунотоксины и изотопы для окрашивания ткани при исследованиях [Coombs G.S., et al., 1998].
Существуют данные, свидетельствующие о том, что измерение ПСА в моче пациентов с подозрением на РПЖ, также как и измерение концентрации ПСА в сыворотке крови, может служить маркером аденокарциномы. Также статистически значимым оказалось определение соотношения концентрации ПСА в моче к его концентрации в сыворотке крови пациента. В ходе экспериментов было установлено, что, даже если значения ПСА в сыворотке находятся в пределах от 2,5 до 10 нг/мл, но при этом концентрация ПСА в моче более 150 нг/мл, то молено утверждать у данного пациента наличие РПЖ. Чувствительность такого теста составляет 92.5 %. Таким образом, если полученные данные будут подтверждены в ходе дальнейших экспериментов, то измерение ПСА в моче пациентов позволит, возможно, снизить количество проводимых им биопсий [Bolduc S, et al., 2007]. Однако, такое измерение ПСА в моче не дает возможности дифференцировать стадию заболевания.