Сравнительный анализ экспрессии генов в атеросклеротических поражениях аорты человека и в лейкоцитах периферической крови больных эссенциальной гипертензией

• Автор: Тимофеева, Анжелика Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 240 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
Глава I. Обзор литературы
1.1. АГ и структурные изменения сосудистой стенки
1.1.1. Нормальная структура артериальной стенки
1.1.2. Пролиферация и апоптоз ГМК сосудов при АГ
1.1.3. Межклеточный фиброз сосудов при АГ
1.1.4. Формирование очагов воспаления в сосудах при АГ
1.2. Морфологические изменения сосудистой стенки во время атерогенеза
1.3. Теории патогенеза АТ
1.3.1. Липопротеидная теория
1.3.2. Теория «реакция на повреждение»
1.3.3. Моноклональная теория
1.3.4. Иммунная теория
1.3.4.а. Инициаторы иммунного ответа в АТП
1.3.4.Ь. Врожденный иммунный ответ при атерогенезе
1.3.4.С. Адаптивный иммунный ответ при атерогенезе
1.4. Экспрессия основных генов-участников атерогенеза
1.4.1. Гены, влияющие на метаболизм липидов в артериальной стенке
1.4.2. Молекулы адгезии
1.4.3. Ростовые факторы
1.4.4. Цитокины и хемокины
1.4.5. Матриксные металлопротеиназы
1.4.6. Оксид азота
1.4.7. Система окисления/антиокисления в сосудах человека
1.4.8. Транскрипционные факторы
1.5. Изучение профиля генетического транскриптома при АТ
1.5.1. Исследование атерогенеза методами DD и SAGE
1.5.2. Исследование атерогенеза с использованием ДНК-микрочипов
1.5.2а. Исследование атерогенеза на клеточных моделях
1.5.2Ь. Исследования атерогенеза на животных моделях
I.5.2с. Исследование атерогенеза у человека
1.6. Заключение
Глава И. Материалы и методы исследования
II. 1. Образцы ЛПК
11.2. Получение и характеристика аутопсийного материала брюшного отдела аорты человека
11.3. Выделение суммарной РНК из ЛПК человека и из образцов интимы аорты человека
11.4. Проверка качества выделенной суммарной РНК
И.5. Приготовление кДНК-зондов для гибридизации с кДНК-
микрочипами
И.6. Гибридизация кДНК-зондов с кДНК-микрочипами
II.7. Математическая обработка гибридизационных данных

И.8. Реакция ОТ

11.10. Анализ продуктов ПЦР
II. 11. Приготовление внешнего ПЦР-стандарта
11.12. Количественная ОТ-ПЦР с внешним стандартом
11.13. Иммуногистохимическое окрашивание
Глава III. Результаты
III. 1. Пригодность образцов суммарной РНК для анализа молекулярнобиологическими методами
III. 1.а. Моделирование распада РНК
III. 1 .Ь. Анализ изменений количеств индивидуальных мРНК методом ОТ-ПЦР в образцах суммарной Т24Р РНК с различным соотношением 28S и
18S рРНК
III. 1.с. Корреляция между степенью распада (числом разрывов) рРНК и индивидуальных мРНК при различном соотношении 28S/18S рРНК
111.2. Обратные транскриптазы и их свойства
111.3. Сравнительный анализ транскриптомов нормальной и пораженной атеросклерозом интимы аорты человека в поисках дифференциально экспрессирующихся генов
111.4. Анализ транскриптома ЛПК больных эссенциальной гипертензией и сопоставление полученных данных с транскриптомом АТП аорты человека

1.3.4.а. Инициаторы иммунного ответа в АТП
• Проведенные недавние исследования отводят главную роль окЛПНП в инициации иммунного ответа в АТП [Hörkkö S, 2000]. При накоплении ЛПНП внеклеточно в интиме артерий, они подвергаются окислительной модификации, приводящей к образованию высоко иммуногенных нео-детерминант, запускающих активацию как врожденного, так и адаптивного типов иммунного ответа. Активация врожденного иммунитета осуществляется через взаимодействие окЛПНП с огромным репертуаром рецепторов [Miller Y1, 2003а]. Кроме того, были выявлены аутоантитела против окЛПНП в плазме экспериментальных животных с гиперхолестеринемией, у которых уровни данных антител коррелировали с тяжестью заболевания АТ [Palinski W., 1995].
• р2-гликопротеин 1 (ß2-GP 1) является высоко гликозилированным белком плазмы, 40% которого циркулирует в связанном состоянии с липопротеинами различных классов, в том числе и с окЛПНП [Kobayashi K., 2003]. ß2-GPl присутствует в субэндотелиальных областях АТП и локализуется вместе с CD4+ Т-лимфоцитами [George J., 1999а]. Исследования на экспериментальных животных показали, что иммунизация мышей, склонных к развитию АТ, путем введения ß2-GPl вызывает как клеточный, так и гуморальный иммунный ответы против ß2-GP 1, и приводит к ускорению развития АТ аорты [George J., 1998; Afek A., 1999]. Было показано, что антитела против ß2-GPl [Ranzolin A., 2004; Romero FI., 1998] положительно коррелируют с ССЗ и его осложнениями.