Роль белков теплового шока и сигнальных белков в регуляции провоспалительного ответа у мышей

• Автор: Новоселова, Татьяна Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Актуальность исследования синдрома системного воспалительного ответа и сепсиса как общемедицинской проблемы
1.1 Л. Эволюция представлений о природе сепсиса
1Л.2. Грамотрицательный сепсис и механизмы его развития
1.2. Медиаторы провоспалительного ответа
1.2.1. Цитокины
1.2.1.1. Интерлейкин - 1 (ИЛ-1)
1.2 Л .2. Интерлейкин - 6 (ИЛ-6)
1.2Л.З. Интерлейкин-10 (ИЛ-10)
1.2.1.4. Фактор некроза опухолей (ФНО)
1.2Л.5. Интерлейкин - 2 (ИЛ-2)
1.2Л.6. Интерферону (ИФН-у)
1.2.2. Активные формы кислорода
1.2.3. Роль оксида азота при воспалении
1.3. Защитные системы клетки в норме и при воспалении
1.3.1. Белки теплового шока
1.3.1.1. БТШ70
1.3.1.2. БТШ90
1.3.1.3. Малые белки теплового шока
1.3.2. Сигнальный каскад ИЕ-кВ
1.3.3. Сигнальный каскад БАРК/ЛЧК
1.3.4. Гелданамицин как ингибитор активности БТШ90
1.3.5. Антиоксиданты и их роль в защите клетки от окислительного стресса
1.3.5.1. Витамин Е (а-токоферол)
1.3.5.2. р-каротин
1.3.5.3. Коэнзим Q (убихинон)
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Животные и модели токсического стресса
2.2. Применение гелданамицина in vitro и in vivo
2.3. Диета с антиоксидантами
2.4. Культура клеток и измерение их функциональной активности
2.4.1. Выделение лимфоцитов
2.4.2. Выделение макрофагов
2.4.3. Измерение продукции ФИО
2.4.4. Измерение продукции интерлейкинов и интерферона-у
2.4.5. Измерение оксида азота
2.4.6. Вестерн блот анализ
2.4.7. Выделение сыворотки
2.4.8. Пролиферативный тест
2.5. Измерение продукции АФК методом хемилюминесцентности
2.5.1. Подготовка опсонированного зимозана (03)
2.5.2. Измерение хемилюминесценции в образцах изолированных клеток
2.6. Статистический анализ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Продукция белков теплового шока, цитокинов и оксида азота при воспалении
3.1.1. Цитокины и оксид азота при воспалениях
3.1.1.1. Цитокины и оксид азота при остром воспалении
3.1.1.2. Цитокины и оксид азота при хроническом воспалении
3.1.1.3. Цитокины в плазме крови при остром воспалении
3.1.2. Исследование белков теплового шока при остром и хроническом воспалении
3.2. Исследование влияния гелданамицина in vitro и in vivo на уровень провоспалительного ответа, индуцированного эндотоксином
3.2.1. Измерение цитотоксичности гелданамицина
3.2.2. Влияние гелданамицина на продукцию сигнальных белков в изолированных лимфоцитах мышей
3.2.3. Влияние гелданамицина на продукцию белков теплового шока в изолированных лимфоцитах мышей
3.2.4. Влияние введения гелданамицина in vivo на продукцию цитокинов и сигнальных белков в условиях острого воспаления,
индуцированного ЛПС
3.3. Снижение уровня провоспалительных ответов у мышей с использованием диеты с антиоксидантами
3.3.1. Липорастворимые антиоксиданты как пищевые добавки
3.3.2. Влияние антиоксидантов, добавленных к изолированным клеткам in vitro
3.3.3. Эффекты антиоксидантов при остром воспалении
3.3.3.1. Цитокины в плазме крови
3.3.3.2. Продукция белка теплового шока БТШ70
3.3.3.3. Фосфорилирование сигнальных белков
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

промоторными участками генов, которые также регулируют процессы транскрипции (de Wit, 1996).
Таким образом, ИФН-у является уникальным цитокином, который контролирует многие клеточные программы через регуляцию транскрипции многих генов. Такая многофункциональность метаболизма ИФН-у обеспечивает повышенный иммунный контроль при инфекциях. Кроме того, ИФН-у обладает способностью к синергическому взаимодействию с другими цитокинами, ростовыми факторами, принимая участие в функционировании различных сигнальных каскадов, что является очень важным фактором в биологии клетки. Действительно, в организме (в условиях in vivo) обычно на клетки действует сразу несколько сигналов, поэтому одной из основных целей биологии ИФН заключается в установлении механизмов, с помощью которых ИФН взаимодействует с другими цитокинами и ростовыми факторами (Decker et al., 2002).
1.2.2. Активные формы кислорода
Кислород является самым распространенным химическим элементом
биосферы, его соединения входят в состав всех живых организмов на планете. Кислород необходим клеткам прокариот и эукариот для продукции энергии, которая, в основном, осуществляется через дыхательную цепь в митохондриях (Скулачев, 1996). Около 90% потребляемого человеком молекулярного кислорода вовлекается в реакции окислительного фосфорилирования, вместе с тем во всех живых организмах постоянно протекают реакции с образованием активных кислородных метаболитов. Многие из этих соединений являются радикалами, т.е. имеют неспаренный электрон, поэтому их часто называют свободными радикалами. Главным событием в исследовании активных форм кислорода стало открытие в 1969 году реакции дисмутации супероксидных радикалов и выявление супероксид дисмутазы (СОД) почти во всех эукариотических клетках (Fridovich, 1995). Это открытие привело к возникновению теории о супероксиде как о токсичном метаболите кислорода, она вызвала большой интерес, связанный с