Протеомное исследование белков культивируемых мышечных и эпителиальных клеток человека

• Автор: Макаров, Андрей Александрович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

Список сокращений
ГЛАВА 1. Современные подходы к изучению белков в
скелетномышечных миобластах, а также в некоторых других нормальных и злокачественных клетках человека (обзор литературы).
1.1. Общая характеристика сателлитных клеток скелетной мускулатуры.
1.2. Ростовые факторы и их роль в регуляции роста сателлитных 17 клеток.
1.3. Исследование мышечных белков с помощью постгеномных 21 технологий.
1.4. Использование постгеномных технологий для исследования 36 белкового состава предстательной железы.
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Реактивы и биологические материалы.
2.2. Методы культивирования клеток человека
2.3. Определение влияния исследуемых препаратов на 40 пролиферацию культивируемых клеток.
2.4. Электрофоретическое разделение белков
2.5. Детекция белков на гелевых пластинах с 45 использованием кумасси голубого R-250 и азотнокислого серебра.
2.6. Фотодокументирование изображений и архивирование гелей
2.7 Масс-спектрометрическая идентификация белков
2.8. Методы статистической обработки результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Исследование белкового состава культивируемых миобластов человека на разных сроках дифференцировки.

3.2. Идентификация новых белков в культивируемых миобластах 57 человека.
3.3. Сопоставление данных протеомного анализа белков 58 культивируемых мышечных клеток человека с информацией о конфликтных определениях аминокислотной последовательности белков, содержащейся в базе данных Бчивв-РпЛ.
3.4. Сравнительный протеомный анализ белков культивируемых ^ миобластов человека и некоторых опухолевых клеток мышечного и
эпителиального происхождения.
3.5. Оптимизация клеточной тест-системы, использующей в качестве 74 тест-объекта культивируемые миобласты человека.
Заключение
Выводы
Благодарности
Использованная литература
Приложения

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
AGR2 Anterior gradient
Brdu Bromodeoxyuridine
FGF Фактор роста фибробластов
HGF Фактор роста гепатоцитов
IGF Иисулиноподобиый фактор роста
IL-6 Интерлейкин
LIF Leukemia inhibitory factor
MALDI- Опосредованная матрицей (времяпролетная) лазерная
TOF десорбция/ ионизация
MRF Myogenic regulatory factor
MS Mass-spectrometry (масс-спектрометрия)
MS/MS Тандемная масс-спектрометрия
NCBI National Centre for Biotechnology Information
Pi Изоэлектрическая точка
SDS Додецилсульфат натрия
TGF-p Трансформирующий фактор роста-бета
rFNF-a Фактор некроза опухолсй-альфа
a.o. Аминокислотный остаток
AA Акриламид
АТФ Аденозинтрифосфат
ГФДГ Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа
ГПЖ Гиперплазия предстательной железы
ДНК Дезоксирибонуклеиновая кислота
кДа Килодальтон
МБА Метиленбисакриламид
Мм Молекулярная масса
мРНК Матричная рибонуклеиновая кислота
ПААТ Полиакриламидный гель
ПСА Персульфат аммония
РПЖ Рак предстательной железы
ТЕМЕД N,N,N’ ,N’ -тетраметилэтилендиамин
ЭТС Эмбриональная телячья сыворотка

Мм.

200—

5.0 7.0 9,5 р1
Рисунок 11. Двумерная электрофореграмма белков пролиферирующих миобластов человека. Указано: внизу - изоэлектрические точки; слева - молекулярная масса, кДа. Нумерация пятен соответствует табл. 3, 4 и 5.
Таблица 3. «Постоянные» белки, идентифицированные на двумерных электрофореграммах в недифференцированных и дифференцирующихся миобластах
№ Название белка № в базе данных ИСВІ % перекрытия Мол. масса, кДа/р!
эксперимент альные расчетные
1 2 3 4 5
1 Комплекс тяжелых и легких цепей ферритина* 47125326 182516 40 41 450,0/5,07 26,2/6,04 16,4/5,65
2 а2-коллаген 1 типа 32451581 18 165,0/5,35 129,3/9,08
3 Неизвестный белок 62702215 47 58,0/7,90 58,8/8,88
4 Винкулин, изоформа УСЬ 24657579 18 120,0/5,30 116,7/5,83
5 Белок ТШВР1 38014595 33 87,0/4,75 73,6/4,91
6 Белок теплового шока, изоформа 5 (70 кДа) 16507237 50 74,0/4,72 72,3/5,07