Создание и анализ трансгенных растений Nicotiana tabacum L. с различными ориентациями гетерологичного гена 3-окси-3-метилглутарил-КоА редуктазы

• Автор: Поройко, Валерий Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 127 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Природные изопреноидные соединения
1.2. Многобразие путей биосинтеза природных изопреноидных соединений
1.2.1. Мевалонатный путь биосинтеза изопреноидов
1.2.2. Роль З-окси-З-метилглутарил-КоА редуктазы в биосинтезе мевалоновой кислоты
1.2.3. Гены, кодирующие З-окси-З-метилглутарил-КоА редуктазу
1.3. Открытие альтернативного немевалонатного пути биосинтеза изопреноидов у эубактерий и зеленых водорослей
1.4. Ранние стадии биосинтеза изопреноидов в высших растениях
1.5. Направленное ингибирование экспрессии эукариотических генов
1.6. Применение антисмысловых РНК в генетической инженерии растений
1.6.1. Модельные системы
1.6.2. Исследования по подавлению экспрессии эндогенных генов растений
1.7. Механизмы действия асРНК и асДНК в клетках эукариот
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды
2.2. Растения, использованные в работе
2.3. Среды, использованные в работе
2.3.1. Микробиологические среды
2.3.2. Среды для культивирования растений

2.4. Растворы, использованные в работе
2.5. Ферменты, использованные в работе
2.6. Другие реактивы и материалы
2.7. Условия культивирования бактерий
2.8. Видоспецифичный тест для Agrobacterium Ште/асгепя и А. гасИоЬас1ег:
образование 3-кетолактозы при окислении
лактозы
2.9. Выделение, очистка и манипуляции с плазмидной ДНК
2.10. Трансформация листовых дисков табака
2.11. Выделение суммарной растительной ДНК
2.12. Введение метки в ДНК
2.13. Скрининг рекомбинантных клонов гибридизацией на
фильтрах
2.14. Перенос растительной ДНК на фильтры по Саузерну
2.15. Гибридизация на фильтрах по Саузерну
2.16. Выделение суммарной растительной РЖ с использованием горячего
фенола
2.17. РЖ-ДЖ гибридизация
2.18. ПЦР-анализ трансгенных растений
2.19. Анализ стеринов методом газожидкостной хроматографии
(ГЖХ)
2.19.1. Подготовка проб для анализа
2.19.2. Анализ
2.20. Спектрофотометрическое определение хлорофиллов а и Ь и каротиноидов
2.21. Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Создание трансгенных растений МсоНапа (аЬасит, содержащих ген hmgl АгаЫс1орх1х ЖаИапа в прямой и обратной ориентациях
3.1.1. Конструирование рекомбинантных плазмид с различными ориентациями гена З-окси-З-метилглутарил-КоА редуктазы АгаЫс1орх!$ ЛаИапа относительно двойного промотора
3.1.2. Перенос рекомбинантных плазмид рЭБ-азкицД и рББ-йпцД в агробактерии
3.1.3. Агробактериальная трансформация растений Ык'оПапа 1а/->асит конструкциями, содержащими ген hmgl А. (ЬаПапа в прямой и обратной ориентациях
3.2. Подтверждение трансгенной природы полученных
растений
3.3. Анализ экспрессии гетерологичного гена hmgl в растениях табака
3.4. Фенотипическое проявление экспрессии гетерологичного гена hmgl А. ЖаИапа в растениях табака в условиях выращивания в закрытом грунте
3.5. Анализ основных групп изопреноидных соединений в трансгенных
растениях
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ.