Исследование на клеточных культурах молекулярных механизмов антипролиферативного и цитотоксического действия витамина К3

• Автор: Коваленко, Дмитрий Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 114 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Молекулярные механизмы апоптоза - общая характеристика
1.1. Морфологические и биохимические
признаки апоптоза
1.2. Каспазы - эффекторные молекулы апоптоза
2. Система Раз-рецептор / Раз-лиганд в контроле апоптоза
2.1. Структурно-функциональная характеристика Раз-рецептора и Раз-лиганда
2.2. Роль Раз-системы в контроле программированной
клеточной гибели в естественных условиях
2.3. Роль Раз-системы в контроле искусственно
вызываемого апоптоза
2.4. Роль Раз-системы в апоптозе, вызываемом действием противоопухолевых химиопрепаратов
3. Витамины группы К как противоопухолевые химиопрепараты
3.1. Химическая структура и физиологическая
роль витаминов К
3.2. Противоопухолевая активность витаминов К
и струтурно близких к ним соединений
3.3. Молекулярные механизмы цитотоксичности
витаминов К
Глава И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Реагенты
2. Аденовирусные векторы и вирусная трансдукция

3. Клеточные культуры
4. Обнаруждение разрывов в клеточном хроматине и анализ фрагментации ДНК
5. Измерение клеточной пролиферации и
анализ синтеза геномной ДНК
6. Анализ экспрессии РНК с помощью Нозерн-блоттинга
7. Детекция апоптоза
8. Иммуноблоттинг
Глава Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Исследование влияния ВКЗ на клеточную
пролиферацию и синтез ДНК
2. Обнаружение повреждений в клеточном хроматине и
анализ фрагментации геномной ДНК при действии ВКЗ
3. Исследование влияния восстановленной формы глютатиона и азидотимидина на антипролиферативное
действие ВКЗ
4. Селекция клеточных клонов линии .Гигкак устойчивых
к цитотоксическому действию Газ-лиганда
5. Анализ развития апоптоза под влиянием ВКЗ
в исходной клеточной популяции и полученных клонах
6. Определение активации каспазы-3 при действии ВКЗ
7. Анализ уровня экспрессии Гав-рецептора и
секреции Газ-лиганда при действии ВКЗ на клетки ЗигкаЦ
8. Исследование развития апоптоза, индуцированного ВКЗ, в спленоцитах линий мышей,
дефектных по функционированию Газ-системы
9. Влияние растворимой формы Газ-рецептора на апоптоз, вызываемый ВКЗ в спленоцитах мышей линии С57ВЬ/6

10. Определение зависимости жизнеспособности клеток при действии Баз-лиганда или ВКЗ от активности ЫБ-кВ
Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

линии <1 (дефектных по Раз-лиганду), пересаженная ткань быстро отторгается [50]. Таким образом, еще одна физиологическая функция Раз-лиганда- это участие в обеспечении иммунопривилегированной природы некоторых областей организма, таких как глаз и семенник.
2.3. Роль Раз-системы в контроле искусственно вызываемого апоптоза.
Помимо роли Раз-системы, выполняемой в естественных условиях, была также определена важность активности данной системы в развитии апоптоза под влиянием ряда искусственных воздействий, таких как облучение клеток гамма- и ультрафиолетовым (УФ) излучениями, индукция окислительного стресса, тепловой шок, экспериментальное гиперэкспрессирование гена с-шус в условиях дефицита ростовых факторов, а также обработка клеток противоопухолевыми химиопрепаратами [31-35].
На модели лимфоцитов мышей дикого типа (линия С57ВЬ/6) и мышей линии 1рг с нефункциональным Раз-рецептором было показано, что ионезирующая радиация приводит к усилению экспрессии Раз-рецептора на поверхности лимфоцитов мышей дикого типа, а уровень возникающего апоптоза существенно выше у них, чем в популяции лимфоцитов мышей линии 1рг [31]. Кроме того, апоптоз, индуцируемый гамма радиацией, может быть существенно снижен добавлением в культуральную среду растворимой формы Раз-рецептора, способной конкурентно ингибировать