+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Клонирование и изучение S-REX - нового гена со специфической компартментализацией mРНК в нейронах

  • Автор:

    Бака, Иван Дмитриевич

  • Шифр специальности:

    03.00.03

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    1999

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    114 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы


ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Дифференцированное распределение мРНК в ооцитах, развивающихся эмбрионах и некоторых типах соматических клеток
1.1.1. Возможные причины асимметричного распределения мРНК в клетках
1.1.2. Сигнальные последовательности, детерминирующие неслучайное распределением РНК в цитоплазме клеток
1.1.3. Возможные механизмы, посредством которых сигнапьные последовательности нацеливают мРНК к местам их локализации
1.2. Особенности дифференцированного распределения мРНК в нейронах
1.2.1. Типы мРНК и их распределение в нейронах
1.2.2. Методические подходы для выявления мРНК, локализованных в дендритах
1.2.3. Возможные механизмы, обуславливающие направленную локализацию мРНК в нейронах и экспериментальные
подходи для их установления
1.3. Применение метода субтрактивной гибридизации для клонирования и изучения генов, специфически экспрессирующихся в определенных типах клеток и органов
1.4. Заключение
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3 2.1. Реактивы и материалы
2.2. Биологические материалы
2.3. Выделение плазмидной ДНК
2.4. "Спасение" рекомбинантной плазмиды in vitro из бактериофага
X ZAPI1
2.5. Элюция фрагментов ДНК из агарозного геля с низкой температурой
плавления
2.6. Радиоактивное мечение ДНК-зонда методом ник-трансляции
2.7. Радиоактивное мечение ДНК-зонда с использованием случайной
затравки
2.8. Выделение суммарной РНК
2.9. Выделение поли(А)+ РНК
2.10. Хроматография на колонке Qiagen tip
2.11. Фракционирование РНК в агарозном геле, содержащем
формальдегид
2.12. Перенос РНК на Hybond N
2.13. Гибридизация PHК-содержащих фильтров
2.14. Синтез DIG кРНК для in situ гибридизации
2.15. Синтез одноцепочечной кДНК
2.16. Биотинилирование поли(А)+ РНК
2.17. Субтрактивное клонирование кДНК из ограниченного
количества биологического материала
2.18. in situ гибридизация с DIG кРНК
2.19. Секвенирование ДНК
2.20. Полимеразная цепная реакция

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ЗЛ. Модифицированный метод конструирования субтрактивной кДНК библиотеки и его применение для выделения синаптомсомспецифических клонов
3.2. S-Rex - новый нейроспецифический ген
3.3. Получение полных кДНК копий для двухосновных транскриптов S-Rex гена крысы и цыпленка
3.4. Нетранслируемые области S-Rex
3.5. NSP - аналог S-Rex в геноме человека
3.6. Сравнительный анализ аминокислотных последовательностей Б-Вехбелков
3.7. Внутриклеточная локализация S-Rex транскриптов
3.8. Экспрессия S-Rex мРНК в эмбриональном и постнатальном развитии
3.9.Другие транскрипты, являющиеся продуктами альтернативного сплайсинга внутренних экзонов S-Rex гена
ВЫВОДЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

новые кислоты, которые не содержат интересующих последовательностей или их количество в 50-100 раз меньше, чем в лидере. В качестве драйвера может выступать поли(А)+ РНК (Hedricket al, 1984; Sive and St John, 1988; Jones et al., 1991), синтезированная на кДНК-матрице кДНК (Zaraisky et al., 1992), двухцепочечная кДНК (Travis and Sutcliffe, 1988), амплифицированная термостабильной полимеразой кДНК (Belyavsky et al., 1989; Wang and Brown, 1991), участки геномной ДНК (Lisitsyn et al., 1993) и одноцепочечные кольцевые ДНК (Duguide et al., 1988; Duguide and Dinauer, 1989; Rubenstein et al., 1990; Friedman and Weissman, 1991). В качестве лидера при создании СП используют высокомеченую кДНК, а при создании СБ - низкомеченую кДНК.
Гибридизация лидера с драйвером проводится в буферном растворе, содержащем 0,1-0,2% SDS (Hedrick et al., 1984; Claiton et al., 1988; Sive and St John., 1988; Jones et al., 1991) либо фенольную эмульсию (Kohne et al., 1977; Travis and Sutcliffe, 1988). От состава гибридизационного буфера зависит способ отделения лидера от комплекса лидер-драйвер: это ГАП-хроматография (Hedricket al., 1984; Travis and Sutcliffe, 1988) либо удаление комплекса лидер-биотинилированный драйвер с помощью стрептавидина и смеси фенол-хлороформ (Sive and St John, 1988; Jones et al., 1991).
Таким образом, детали методов, используемых для клонирования специфичных генов, достаточно разнообразны, но, к сожалению, при их применении не всегда получаются однозначные результаты. Например, при клонировании генов, специфически экспрессирующихся в коре головного мозга, проводили скрининг кДНК библиотеки, полученной на основе поли(А)+ РНК, выделенной из коры, с помощью СП (Travis and Sutcliffe, 1988). Для синтеза лидера использовался lMCi (а-32Р)дАТФ. В качестве драйвера

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.117, запросов: 967