Биологические свойства изолятов ВИЧ-1, выделенных от пациентов с территорий СНГ

• Автор: Сахурия, Ирма Бухутиевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 с.

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.
АЗТ, AZT - азидотимидин (3’-азидо-2 З’-дидезокситимидин, зидовудин, ретровир)
АЗТМФ, AZTMP - монофосфат азидотимидина АЗТТФ, AZTTP - трифосфат азидотимидина ВИЧ - вирус иммунодефицита человека ИФА - иммуноферментный анализ
МПК, РВМС - мононуклеары периферической крови (peripheral blood mononuclear cells
ПААГ - полиакриламидный гель ПЦР, PCR - полимеразная цепная реакция PC - ростовая среда
СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита
ФГА - фитогеммагглютинин
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат
АМР - аденозинтрифосфат
Asp - аспартат
Asn - аспарагин
Arg - аргинин
CD5o - 50% цитотоксическая доза
dNTP - трифосфат дезоксинуклеозида
ddA - дидезоксиаденозин
ddC - дидезоксицигидин, зальцитабин
d4C - 2’, 3’ -дидезокси -2’, З’-дидегидроцитидин
ddG - дидезоксигуанозин
ddl - дидезоксиинозин, диданозин
ddT - дидезокситимидин
d4T - 2’, 3’-дидезокси-2’, З’-дидегидротимидин
Fab - фрагмент молекулы иммуноглобулина, несущий один
антигенсвязывающий центр (antigen binding fragment)
FCS - телячья эмбриональная сыворотка FTC - дезоксифтороцитидин
ELISA - твердофазный иммуноферментный анализ env - ген ВИЧ, кодирующий белки оболочки gag - ген ВИЧ, кодирующий белки сердцевины Gin - глутамин
gpl20 - поверхностный вирусный гликопротеин массой 120kD gp41 - поверхностный вирусный гликопротеин массой 41 kD GTP - гуанозинтрифосфат
HEPES - N-2-гидроксиэтилпиперазин - N 5, 0-2-этансульфоновая кислота
HHV - вирус простого герпеса
HpddA - фосфонат дидезоксиаденозина
HpddT - фосфонат дидезокситимидина
HU - гидроксимочевина
Ш50 - 50% ингибирующая доза
IDgo - 90% ингибирующая доза
NSI - несинцитийобразующий
Met - метионин
MDR - клетки с множественной лекарственной устойчивост (multidrag-resistant cell)
МТТ - 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиум бромид PBS - фосфатно-солевой буфер Phe - фенилаланин
pol - ген ВИЧ, кодирующий обратную транскриптазу р170 - трансмембранный гликопротеин массой 170kD r/h - фенотип ВИЧ-1: быстрый с высокой продукцией вирусных антигенов RT - обратная транскриптаза SI - синцитийобразующий SIV - вирус иммунодефицита приматов
s/1 - фенотип ВИЧ-1: медленный с низкой продукцией вирусных антигенов ТСГО50 - инфекционная доза вируса, приводящая к продуктивной вирусной инфекции в культуре клеток в 50% случаев ТК - тимидинкиназа Thr - треонин
ЗТС - тритиоцитидин, ламивудин Туг - тирозин
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
Этиология и эпидемиология ВИЧ
Молекулярная биология и жизненный цикл вируса иммунодефицита
человека
Генетическая изменчивость ВИЧ
Субтипы ВИЧ-1 и их географическое распространение
Фенотипические свойства различных вариантов ВИЧ
Внутриклеточные факторы, влияющие на фенотип ВИЧ
Химиотерапия ВИЧ-инфекции и СПИДа
ЧАСТЬ И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
ВИЧ-инфицированные пациенты
Клеточные культуры
Вирусные штаммы
Культуры донорских мононуклеаров периферической крови (МПК)
Определение числа жизнеспособных клеток с помощью исключающего
витального красителя трипанового синего
Определение числа жизнеспособных клеток с помощью МТТ-теста
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
Иммуноферментный анализ (ИФА) для определения антигенов ВИЧ
Определение ТСГО50
Изоляция ВИЧ в смешанной культуре МПК ВИЧ-инфицированных пациентов и
МПК здоровых доноров
Исследование in vitro фенотипических особенностей изолятов

Азидотимидин (AZT)

ЧАСТЬ II.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
ВИЧ-инфицированные пациенты.
В данной работе использовались МГ1К и сыворотки крови тридцати шести ВИЧ-инфицированных пациентов: двадцать девять из них проходили
медицинское наблюдение и курс лечения в Институте иммунологии М3 РФ (Москва) (лечащий врач - Папуашвили Марина Нодаровна) и в Клинической инфекционной больнице N 2 г. Москвы (лечащий врач - Иванников Евгений Васильевич); семь пациентов - в районной поликлинике г. Светлогорска (Гомельская область Беларуси) (лечащий врач - Гадынская Нина Ивановна). Пациенты находились на различных стадиях ВИЧ-инфекции, и особенности их клинического статуса обсуждаются далее в соответствующих разделах данной главы.
Клеточные культуры.
Использовались следующие лимфобластоидные CD4+ клеточные линии: Н9 [Mann D.L., 1989; Popovic М., 1984; Popovic М., 1984] СЕМ, СЕМ NC", МТ-4, МТ-2, СЕМ-SS [Foley G.M., 1965; NaraP.L., 1987; NaraP.L., 1988] Sup-Tl [Smith S.D., 1984]; а также CD4+ клеточная линия THP-1 моноцитарного происхождения. Все линии клеток содержатся в коллекции клеточных линий группы иммунохимии НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН и были получены в рамках программы NIH AIDS Research and Reagent Program. Все перечисленные выше клеточные линии являются суспензионными. Их культивирование осуществлялось в ростовой среде (PC) следующего состава: RPMI-1640 (Институт полиомиелита, Россия), 8-15 % сыворотка плодов крупного рогатого скота (Sigma, США); 300 мкг/мл L-глутамин (Sigma, США); 50-100 мкг/мл сульфат гентамицина (Sigma, США). Клетки выращивали в 50 мл