+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Плазмидные гены, определяющие синтез микроцина С51, и регуляция их экспрессии

  • Автор:

    Фоменко, Дмитрий Эдуардович

  • Шифр специальности:

    03.00.03

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    1999

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    109 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы


Содержание

Введение
Обзор литературы
1. Общая характеристика микроцинов
2. Микроцины типа В
2.1. МикроцинВ17
2.1.1. Структура и биосинтез микроцина В17
2.1.2. Механизм антибиотического действия микроцина В17
2.1.3. Генетический контроль синтеза микроцина
В17 и иммунитета к нему
2.2. Другие микроцины типа В
3. Микроцины типа С
3.1. Структура и действие
3.2. Генетический контроль синтеза микроцинов С типа
4. Микроцины типа Б
5. Микроцин типа Е
6. Микроцин типа Н
7. Микроцин
8. Микроцины типа А
9. Колицины V как микроцины
Материалы и методы
Результаты и обсуждение
1. Анализ продуктов экспрессии генов рекомбинантных плазмид, определяющих синтез микроцина С51
2. Определение нуклеотидной последовательности
микроцинового оперона
3. Изучение функций отдельных генов микроцинового оперона
4. Изучение регуляции экспрессии генов микроцинового оперона

5. Влияние продукции микроцина С51 на свойства вакцинного
штамма Shigella flexneri
Заключение
Выводы
Литература

Введение
Актуальность темы.
Проблема антагонистических взаимоотношений микроорганизмов в природных экологических системах вызывает пристальное внимание исследователей - специалистов различных областей биологии и медицины. Одним из существенных аспектов этой проблемы является изучение способности микроорганизмов продуцировать антибиотические вещества. Работы, связанные с поиском и исследованием новых и уже известных антибиотиков, проводятся в большом количестве лабораторий во всех развитых странах мира; эти исследования имеют огромное значение для современной медицины.
В 1976 г. в результате поиска антибиотических веществ при выращивании бактерий семейства Enterobacteriaceae на бедных питательных средах была обнаружена новая группа антибиотиков, названных микроцинами. Микро-цины - это низкомолекулярные антибиотики пептидной природы с широким спектром действия; они активны, главным образом, в отношении грамотрица-тельных бактерий. При исследовании микроцинов были выявлены новые, необычные химические структуры. В биосинтезе наиболее исследованного мик-роцина В17 были обнаружены новые типы посттрансляционных модификаций. Микроцины вызывают сейчас большой интерес. Свидетельством этого может быть цитата из статьи д-ра J. Liu (Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1994, 91:4618): "Среди недавно открытых антибиотиков микроцины являются ярчайшим примером богатства химии и биологии... и изобретательности природы в создании широкого разнообразия необычных структур антибиотиков, которые химики-синтетики могли бы вообразить лишь в самых горячих мечтах".
Синтез микроцинов и иммунитет к собственному микроцину клетки-продуцента в большинстве изученных случаев определяются плазмидами. Исследование новой группы специфических плазмидных генов, участвующих в синтезе микроцинов, продуктов этих генов, регуляции их экспрессии представляет несомненный интерес. Изучение генетического контроля синтеза

(30 с при 95 °С, 30 с при 55 °С, 60 с при 70 °С) с последующими 10 циклами (30 с при 55 °С и 60 с при 70 °С). Реакцию останавливали добавлением 5 мкл 80% раствора формамида и прогреванием при 95 °С в течение 5 мин. 1-4 мкл из водной фазы наносили на секвенирующий гель для электрофореза. Использовали 6% полиакриламидный гель с добавлением 7 М мочевины.
Анализ нуклеотидных последовательностей проводился при помощи программных пакетов DNASUN и PCGene.
Для электропорации использовали следующий метод: клетки E.coli растили в 50 мл среды LB до оптической плотности 0,3 по спектрофотометру (600 н.м.), центрифугировали 10 мин. при 4000 об/мин и три раза промывали 50 мл. дистиллированной воды. Клетки суспендировали в 0.1 мл 10% глицерина. Для электропорации брали 0.5 мкг ДНК и 40 мкл клеток. Электропорацию проводили при напряжении 1.2 В в течение 5 мс. Далее клетки подращивали в течение часа в среде LB и высевали на селективную среду.
Для получения миниклеток использовали метод, описанный Stoker et al, 1974. Суспензию миниклеток инкубировали в среде LB при 37°С без аэрации в течение 45 мин. Добавляли 50 мкКл 358-метионина и инкубировали при 37°С с аэрацией 1 час 15 мин. Меченые клетки отмывали минимальной средой (см. выше) от избытка метки, центрифугировали 5 мин при 16000 об/мин, и суспендировали в 100 мкл буфера ТЕ. Суспензию клеток прогревали 2 мин. на водяной бане. Полученный препарат анализировали методом электрофореза в ПААТ.
Электрофорез белков проводили в 15% ПААТ при напряжении 50 В в течение 10 часов по методике (Stoker et al, 1974).
Для определения активности ß-галактозидазы клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе. Активность ß-галактоозидазы измеряли по методу Миллера.(1978).
Трансдукцию с использованием фага PlVir проводили по методу (Миллер, 1978).

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.107, запросов: 967