Изменение функционального состояния синтетического аппарата иммунокомпетентных клеток животных in situ под действием ионизирующего излучения : Микроспектральное флуоресцентное исследование

• Автор: Сергиевич, Лариса Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 106 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. Литературный обзор
1.1. Общая характеристика клеток иммунной системы
1.2. Действие ионизирующей радиации на лимфоциты
1.2.1. Особенности действия острого и хронического у-облучения на лимфоциты крови и клетки тимуса
1.2.2. Механизмы действия малых доз ионизирующей радиации на живые организмы
1.2.3. Радиационная гибель лимфоцитов
1.2.4. Подавление функциональной активности лимфоцитов под действием облучения
1.2.5. Активирующее действие облучения на лимфоциты
1.3. Флуоресцентные методы исследований
1.3.1. Связывание флуорохромов с нуклеиновыми кислотами
1.3.2. Основные методы флуоресцентной цитохимии нуклеиновых кислот и области их применения
1.3.3. Флуоресцентный микроспектральный анализ 45 ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1. Животные и условия облучения
2.2. Приготовление образцов крови
2.3. Приготовление препаратов тимуса
2.4. Флуоресцентный микроспектральный анализ
2.5. Статистическая обработка данных 2.6. Метод проточной цитометрии

ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение
3.1. Действие острого у-облучения на иммунокомпетентные клетки
животных
3 Л Л. Лимфоциты периферической крови
ЗЛ.2. Модель апоптоза на тимоцитах крыс
3 Л .3. Клетки тимуса
3.2. Действие хронического у-облучения на лимфоциты крови животных
3.2Л. Хроническое у-облучение с мощностью дозы 14,4сГр/сут
3.2.2. Действие хронического облучения с различными мощностями доз на лимфоциты крови крыс в отдаленный период облучения
3.2.3. Сравнительное исследование действия хронического у-облучения на лимфоциты крови кроликов и крыс
3.3. Обсуждение полученных результатов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АМ - активационные маркеры АГ - антиген
НК - нуклеиновые кислоты
ЛПС - липополисахарид
ФГА - фитогемагглютинин
ПТ Л - предшественники Т-лимфоцитов
АО - акридиновый оранжевый
ЭБ - этидиум бромид
процессы, протекающие непосредственно в живой клетке и ее органоидах. Нуклеиновые кислоты (НК) не обладают флуоресценцией при комнатных температурах, поэтому флуоресцентный вариант их анализа основан на использовании флуоресцентных красителей (флуорохромов). Такие флуорохромы должны образовывать с НК специфические комплексы с характерными спектральными свойствами. В структурном аспекте все множество известных комплексов НК с флуоресцирующими лигандами разделяется на три группы. В первую группу следует отнести комплексы с соединениями, способными интеркалировать, -располагаться между плоскостями пар оснований НК. Связывание такого типа приводит к ряду изменений структуры и свойств НК: раскручиванию спирали НК, ее удлинению, уменьшению гибкости молекул и др. (Waring, 1981). Примерами могут служить акридиновые красители, этидий и др. Комплексы других типов относятся к неинтеркалирующим. Это либо лиганды, расположенные в большом или малом желобе спирали НК, либо лиганды, расположенные снаружи молекул НК. Стабильность комплексов последнего типа определяется в основном электростатическими взаимодействиями с полифосфатными цепочками НК, в то время как для комплексов первого типа определяющими факторами являются стерическое соответствие структуры лиганда поверхности желоба (Zimmer & Wahnert, 1986). Типичными примерами флуорохромов этих групп являются производные бис-бензимида типа Hoechst 33258 и Hoechst 33342 (Comings, 1975) и DAPI (Mazini et al, 1983). Многие лиганды могут образовывать специфические комплексы: одни - с участками ДНК, богатыми А-T парами (Hoechst, DAPI), другие - с G-С парами (антибиотики 7-актиномицин D. митрамицин и др. связываются в присутствии ионов Mg2+).
Среди существенных физико-химических характеристик лигандов, связывающихся с НК, принципиальное значение имеют величина константы связывания, характеризующая прочность образующихся комплексов, и коэффициент распределения лигандов между НК и раствором. Большинство акридиновых красителей и сходных е ними по структуре