+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Одиночные поры, индуцированные электрическим полем в липидном бислое

  • Автор:

    Меликов, Камран Чингиз оглы

  • Шифр специальности:

    03.00.02

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    1999

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    104 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

Оглавление.
Введение.
Часть I. Литературный обзор
Глава 1.1. Электрический пробой клеток
1.1.1. История вопроса.
1.1.2. Значение исследований электрического пробоя.
Глава 1.2. Феноменология электрического пробоя БЛМ.
1.2.1. Необратимый электрический пробой.
1.2.2. “Стрессованное” состояние.
1.2.3. Обратимый пробой.
Глава 1.3. Механизм электропорации.
1.3.1. Ранние теории электрического пробоя.
1.3.2. Формирование пор при электропорации.
1.3.3. Теория электропорации.
1.3.4. Гидрофильные и гидрофобные поры.
1.3.5. Метастабильные поры.
1.3.6. Заключение.
Часть П. Материалы и методы.
II. 1. Эксперименты на плоских бислойных липидных мембранах.
11.2. Эксперименты на мембранах на конце микропипетки.
П.З. Электрическая схема измерений.
П.4. Реактивы.
П.5. Липидный состав мембран.
Часть Ш. Результаты.
Глава III. 1. Общая картина изменений проводимости БЛМ, вплоть до разрушения.
Ш. 1.1. Картина электрического пробоя плоских БЛМ из ДФФХ.
III. 1.2. Картина электрического пробоя участка мембраны из ДФФХ на конце стеклянной микропипетки
Глава 111.2. Ступенчатые изменения проводимости мембраны, индуцированные электрическим полем
III .2.1. Эксперименты наплоских БЛМ
Ш.2.2. Эксперименты на мембранах на конце микропипегки
Глава Ш.З. Рост проводимости мембраны связан с накоплением метасгабильных пор
Ш.З. 1. Обратимость изменений проводимости
111.3.2. Рост проводимости мембраны связан с формированием более чем одного дефекта
Глава Ш.4. Свойства проводящих дефектов- метасгабильных пор
Ш.4,1. Анализ проводимости пор
Ш.4.2. Анализ времен жизни пор
Ш.4.3. Анализ константы скорости “рождения” пор
III.4.4. Среднее количество пор перед необратимым разрушением мембраны
Глава Ш.5. Непроводящее дефектное подсостояние- “предпоры”
Ш.5.1. Флуктуации проводимости БЛМ из ДФФХ вблизи
уровня фоновой проводимости: пачечная активность.
111.5.2. Влияние предобработки на рост проводимости
мембраны.
Часть IV. Обсуждение
Выводы
Литература
Введение.
Известно, что под действием достаточно высоких потенциалов происходит сильное увеличение проводимости клеточных и искусственных мембран. После выключения внешнего поля проводимость мембраны может вернуться к исходному значению. Этот феномен носит название обратимой электропорации или обратимого электрического пробоя. В случае, если амплитуда или длительность импульса внешнего напряжения достаточно велики, происходит необратимое разрушение мембраны.
Интерес к электрическому пробою связан с тем, что уже много лет электропорация используется в различных биотехнологических приложениях и в медицине [1, 2]. Среди биотехнологических приложений, в которых электропорация нашла широкое применение, необходимо отметить трансфекцию различных типов клеток - от прокариот до дрожжей, растительных и животных клеток [1, 3-7]. Другой областью применения электрического пробоя плазматической мембраны является введение в клетку различных веществ в разных экспериментальных целях. Так введение в клетки рестриктаз дает возможность исследовать влияние специфических делений на клеточную жизнедеятельность [5]. Введение в клетку с помощью электропорации антител к определенным белкам позволяет ингибировать их работу в клетке [1,5, 8]. Электропорация также может использоваться для прижизненной окраски клеточных органел различными флуоресцентными красителями [5, 9]. Электропорация находит применение и в медицине для лечения раковых заболеваний [1, 10, 11]. Кроме того интерес к исследованиям электрического пробоя проявляют исследователи, занимающиеся экзоцитозом и вирусным слиянием. Ряд авторов предполагает, что одной из промежуточных стадий в этих биологически важных процессах является липидная пора - структура, формирование которой предполагается и при электропорации [12-14].
§ 11.2. Эксперименты на мембранах на конце микропипетки
как целью этих исследований было зарегистрировать изменения
проводимости, связанные с формированием одиночных проводящих
дефектов, то большое значение имел уровень шума. Простейший путь
уменьшения уровня шума - уменьшение площади (а следовательно и
электрической емкости) мембраны. Сильное уменьшение площади
плоского бислоя невозможно из-за особенностей процедуры формирования
плоских БЛМ. Другая возможность заключается в формировании мембраны
на конце стеклянной микропипетки. Для получения мембраны на конце
микропипетки в этой работе был использован следующий метод:
формировалась “сухая” плоская БЛМ (методика формирования описана в
§ II. 1), после этого мембрана “пэтчилась” с помощью стеклянной
микропипетки аналогично “пэтчу” клеточных мембран [91]. При этом между стеклом микропипетки и мембраной формировался контакт с высоким сопротивлением утечки (20-100 ГОм), что позволяло проводить измерения на маленьком участке мембраны под пипеткой с площадью около 10 мкм. Благодаря этому данный метод позволил повысить соотношение сигнал/шум по сравнению с измерениями на мембране большего размера в 10-30 раз. Микропипетки вытягивались из капилляров на программируемой микрокузнице, заполнялись раствором, содержащим 100 мМ КС1 и 5 мМ Hepes, с pH равным 7,0 и использовались в тот же день. Сопротивление микропипеток составляло около 1 МОм. Раствор, используемый при заполнении фильтровался непосредственно перед заполнением через 0.22-микронные фильтры (Millipore, США). Микропипетка подводилась к мембране с помощью микроманипулятора 860МСЗ (Newport, США). Необходимо отметить, что при разрушении участка мембраны под пипеткой остальная мембрана сохраняла свою целостность. Были проведены контрольные эксперименты, в которых одновременно регистрировался как ток через мембрану в пипетке, так и ток через высокоомный контакт. Было показано, что в процессе измерений проводимость контакта мембраны со стеклом не меняется, что говорит о
стабильности высокоомного контакта в ходе эксперимента.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.143, запросов: 967