Механизмы внутриклеточной сигнализации в перитонеальных макрофагах

• Автор: Крутецкая, Зоя Иринарховна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 459 с. : ил.

Оглавление
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Системы вторичных посредников и их роль в регуляции 14 клеточных процессов
1.1.1. Аденилатциклазный путь передачи информации
1.1.2. Фосфоинозитидный путь передачи сигнала
1.1.3. Арахидоновая кислота и ее продукты: пути образования и
метаболизма в клетках
1.1.3.1. Структура арахидоновой кислоты и других жирных кислот
1.1.3.2. Механизмы образования свободной арахидоновой кислоты в
клетках
1.1.3.3. Метаболизм арахидоновой кислоты
1.1.3.4. Метаболизм арахидоновой кислоты в макрофагах
1.1.3.5. Модуляция активности ионных каналов клеток 51 арахидоновой кислотой и другими жирными кислотами
1.1.4. Тирозинкиназы и тирозинфосфатазы
1.1.4.1. Рецепторы с тирозинкиназной активностью
1.1.4.1.1. Общая характеристика рецепторных тирозинкиназ
1.1.4.1.2. Рецептор гормона инсулина
1.1.4.1.3. Рецептор фактора роста тромбоцитов
1.1.4.2. Нерецепторные тирозинкиназы
1.1.4.3. Тирозинфосфатазы
1.1.4.4. Ингибиторы тирозинкиназ и тирозинфосфатаз
1.1.4.5. Модуляция активности ионных каналов тирозинкиназами и
тирозинфосфатазами
1.1.5. Гуанилатциклазная система
1.1.6. Заключение
1.2. Механизмы Са2+-сигнализации в клетках
1.2.1. Механизмы мобилизации Са2+ из внутриклеточных депо
1.2.1.1. Са2+-депо мышечных клеток

1.2.1.1.1. Биофизические характеристики и регуляция рианодин- 86 чувствительных Са2+-каналов
1.2.1.1.2. Структура рианодинового рецептора
1.2.1.2. Са2+-депо немышечных клеток
1.2.1.2.1. Структура рецептора для инозитол-1,4,5-трифосфата (1Р3)
1.2.1.2.2. Регуляция активности 1Рз-рецептора
1.2.1.2.3.Биофизические характеристики 1Рз-чувствительных каналов 95 Са2+-выброса
1.2.2. Механизмы входа Са2+ в клетки
1.2.2.1. Типы и структурно-функциональная организация потенциал- 97 зависимых Са2+-каналов
1.2.2.2. Механизмы входа Са2+ в невозбудимые клетки
1.2.2.2.1. Депо-зависимый вход Са2+ в клетки
1.2.2.2.2. Модели с участием водорастворимых вторичных 112 посредников
1.2.2.2.3. Модель "конформационного связывания " ("conformational 117 coupling" model)
1.2.2.2.4. Модели, предполагающие встраивание в плазматическую 119 мембрану мембранных везикул, содержащих депо-зависимые Са2+-каналы
1.2.2.2.5. Биофизические характеристики и механизмы регуляции 120 депо-зависимых Са2+-каналов
1.2.2.2.6. Молекулярная природа депо-зависимых Са2+-каналов
1.3. Структурно-функциональная организация
пуринорецепторов
1.4. Заключение по обзору литературы и постановка задачи 132 исследования
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Объект исследования
2.2. Растворы
2.3. Установка для измерения внутриклеточной концентрации Са2+
с помощью флуоресцентного Са2+-зонда Fura-2AM Глава 3. Результаты экспериментов и их обсуждение

3.1. Роль тирозинового фосфорилирования в регуляции Са2+-
ответов в перитонеальных макрофагах крысы
3.1.1. Влияние ингибиторов тирозинкиназ и тирозинфосфатаз на
Са2+-ответы, индуцируемые пуринергическими агонистами, тапсигарганом и циклопьязониковой кислотой в перитонеальных макрофагах крысы
3.1.2. Влияние ингибитора тирозинфосфатаз фениларзиноксида на внутриклеточную концентрацию Са+ в перитонеальных макрофагах крысы и фибробластах человека
3.1.3. Влияние окисляющих реагентов Н2О2 и 1Ч-этилмалеимида, ингибирующих тирозинфосфатазы, на [Са2+ф в перитонеальных макрофагах
3.2. Органические и неорганические блокаторы потенциал-
зависимых Са2+-каналов ингибируют депо-зависимый вход Са2+ в перитонеальные макрофаги крысы
3.3. Влияние ингибиторов метаболизма арахидоновой кислоты
на Са2+-сигналы, вызванные АТФ, УТФ, тапсигаргином и циклопьязониковой кислотой в перитонеальных макрофагах крысы
3.3.1. Влияние ингибитора фосфолипазы А2 4-бромфенацилбромида
на Са2+-сигналы в макрофагах
3.3.2. Влияние ингибиторов циклооксигеназного пути окисления АК
на Са2+-сигналы в макрофагах, вызванные АТФ, УТФ, тапсигаргином и циклопьязониковой кислотой
3.3.3. Влияние ингибиторов липоксигеназного пути окисления АК на Са2+-сигналы, вызванные АТФ, УТФ, тапсигаргином и циклопьязониковой кислотой
3.3.3.1. Влияние нордигидрогуаретиковой кислоты
3.3.3.2. Влияние каффеиковой кислоты
3.3.3.3. Влияние байкалейна
3.3.4. Влияние ингибиторов эпоксигеназного пути окисления АК на Са2+-сигналы, вызванные АТФ, УТФ, тапсигаргином и циклопьязониковой кислотой

эндотелиальных клетках АК входит главным образом в состав фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина и фосфатидилинозитола (Whatley et al., 1990). В тромбоцитах АК содержится в фосфатидилхолине, фосфатидилэтаноламине, фосфатидилсерине и фосфатидилинозитоле (Nozawa et al., 1991). В макрофагах АК составляет 25% жирных кислот мембран (Scott et al., 1980).
АК освобождается из клеточных мембран в ответ на рецепторзависимую и рецепторнезависимую стимуляцию различных клеток (Needleman et al., 1986; Axelrod et al., 1988; Axelrod, 1990).
Различают несколько механизмов освобождения АК из фосфолипидов мембран (Irvine, 1982; Axelrod et al., 1988; Axelrod, 1990; Rana, Hokin, 1990). 1. Наиболее прямой механизм включаег в себя непосредственное освобождение АК из мембранных фосфолипидов под действием фосфолипазы А2. Фосфолипазы А2 катализируют гидролиз сложноэфирной связи между АК и глицерофосфолипидом в положении sn-2. Эти фосфолипиды включают в себя фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фоефатидилсерин, фосфатидилинозитиды, фосфатидную кислоту и плазмалогены. В результате гидролиза образуются свободная АК и лизофосфолипиды. 2. Менее прямой механизм состоит в освобождении АК из диацилглицерола (1-ацил-2-арахидоноил глицерола) при действии диацилглицероллипазы. Диацилглицерол образуется при воздействии фосфолипазы С на некоторые фосфолипиды, такие как фосфатидилхолин и фосфатидилинозитол. Ингибитором диацилглицероллипазы является агент RHC 80 267 (Weiss, Insel, 1991). 3. Кроме того, диацилглицерол может активировать протеинкиназу С, которая в свою очередь стимулирует фосфолипазу Аг, катализирующую освобождение АК из фосфолипидов (Whatley et al., 1990). 4. Возможно также образование АК в результате активации мембранных рецепторов (например, рецепторов эпидермального фактора роста), приводящей к стимуляции связанной с ними тирозинкиназы, которая в свою очередь непосредственно акгивирует фосфолипазу А2 (Peppelenbosch et al., 1992). Фосфолипаза А2 катализирует освобождение АК из фосфолипидов мембран. Образование свободной АК в результате действия фосфолипазы А2 ингибируется производными
гидроксибензилидинмалононитрила, известными как тирфостины и являющимися специфическими блокаторами тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста (Holowka, Baird, 1992). 5. Диацилглицерол может фосфорилироваться диацилглицеролкиназой с образованием фосфатидной кислоты. АК освобождается из