Регуляция входа Ca2+ в электроновозбудимых клетках Ca2+-мобилизующими агентами

• Автор: Дедкова, Елена Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 128 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1. Са2+-ТРАНСПОРТИРУЮЩИЕ СИСТЕМЫ КЛЕТКИ
2. МЕХАНИЗМЫ ВХОДА Са2+ В КЛЕТКИ. 10 2 I Рецептор-управляемые Са2+-транспортирующие каналы плазматической мембраны
2.1.1. Истинные рецептор-управляемые каналы
2.1.2. Са2+-каналы, активируемые вторичными посредниками
2.1.3. G-белок-управляемые Са2+- каналы
2.2. Са2 -каналы, регулируемые высвобождением Са' из внутренних депо
(store-release-activated channel, CRAC)
2.2Л. Характеристика запас-регулируемого входа Са2+
2.2.2. Механизм активации Icrac
2.2.3. Фактор входа Са2+ (Ca2+-influx factor, CIF)
2.2.4. Другие цитозольные факторы
2.3. Потенциал-управляемые кальциевые каналы
3. ПОДДЕРЖАНИЕ НИЗКОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ Ca2t В ЦИТОПЛАЗМЕ КЛЕТОК.
ПУТИ ВЫХОДА Са2+ ИЗ КЛЕТКИ
3.1. Кальциевые насосы внешней и внутренних мембран клетки
3.1.1. Са2+-АТРаза плазматических мембран
3.2. Na7Ca2+ -обменник
3.3. Транспорт Са2 митохондриями
3.4. Са2’/Н -обменник
4. ВЫСВОБОЖДЕНИЕ ИОНОВ Са2+ ИЗ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ДЕПО
ПОД ДЕЙСТВИЕМ ИНОЗИТОЛ-1,4,5-ТРИСФОСФАТА
4.1. Активация инозитол 1,4,5-трисфосфатом кальциевых каналов
4.2. Молекулярная структура рецепторов инозитол 1,4,5-трисфосфата
4.3. Факторы, влияющие на высвобождение Са2 из внутриклеточных депо под
действием 1 Pq
5. АР АХИ ДОНОВ АЯ КИСЛОТА И ЕЁ ВЛИЯНИЕ НА РЕГУЛЯЦИЮ

ТРАНСПОРТА Са2+
5.1. Влияние АА на концентрацию свободных ионов
5.1.1 Действие АА на мобилизацию Са2+ из внутриклеточных депо
5.2. Модуляция АА активности рецептор-управляемых Са2'-каналов
5.2.1. АА-индуцируемое повышение [Са2 ]; в интактных клетках
5.2.2. Действие АА на рецептор-стимулируемое повышение [Са2 ];
6 Са2 -ИОНОФОРЫ - ОСНОВНОЙ ИНСТРУМЕНТ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
РОЛИ Са2+ КАК ВТОРИЧНОГО МЕССЕНДЖЕРА
7 Т-КЛЕТКИ ПАМЯТИ - ОСНОВА ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ПАМЯТИ
7.1. Изоформы CD45 отличают “наивные” Т клетки и Т-клетки памяти
Глава И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1 Получение клеток
2. Используемые среды
3. Измерение [Са2'];
4. Измерение pH;
5. Измерение Са2+ во внутриклеточных структурах
6. Установка
7. Измерение продукции активных форм кислорода (АФК)
8 Используемые реактивы
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1 МЕХАНИЗМ АКТИВИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ Са2+-ИОНОФОРОВ
НА ИНТАКТНЫЕ КЛЕТКИ
1.1. Ионофор-индуцируемый вход Са2+ в клетки
1.1.2. Влияние арахидоновой кислоты (АА) и ингибиторов
метаболизма АА на пономицин-индуцнруемый Са2 -сигнал
1.2. Ионофор-индуцируемая мобилизация Са2+ из внутриклеточных структур
1.3. Ионофор-резистентные клетки
1.4. Обсуждение результатов
2. МЕХАНИЗМ ИНГИБИРОВАНИЯ ВХОДА Са22 В КЛЕТКИ
АРАХИДОНОВОЙ КИСЛОТОЙ
2.1 .Обсуждение результатов

3. ВЗАИМОСВЯЗЬ ВХОДА Са2+, ВЫЗЫВАЕМОГО Са2+-МОБИЛИЗУЮЩИМИ
АГЕНТАМИ И ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ОТВЕТА КЛЕТОК
3.1. Усиливающее действие Са2+-ионофоров на вызываемый форболовым эфиром
респираторный взрыв нейтрофилов
3.2. Роль экстраклеточного Са2+ в праймировании РМА-индуцируемого респираторного
взрыва Са2+-ионофорами
3.3. Роль фосфолнпазы А2 и арахидоновой кислоты (АА) в усилении Са2+-ионофорами РМА-
индуцируемого респираторного взрыва
3.4. Обсуждение результатов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

и проводимость каналов (Maeda et al., 1991). ATP также способен “вытеснять” IP;, из 1Р3-специфических сайтов, подтверждая тем самым, что АТР конкурирует с 1Р3, когда миллимолярные концентрации АТР используются (Maeda et al., 1991). Так, IP3-индуцированное высвобождение Са2' ингибировалось, когда концентрация АТР превышала 0,5 мМ, если низкие концентрации 1Рз были использованы (Lino, 1991).
В работе Безпрозванного и Эрлиха (Bezprozvanny & Ehrlich, 1993) на примере одиночного канала, встроенного в исскуственные бислои показаны эффекты АТР на IPs-рецептор. АТР один незначительно открывает IPj-канал, но добавление АТР или негидролизуемых аналогов АТР в присутствии 1Р3 увеличивает частоту открывания канала в 4,8 раз и среднюю продолжительность открытого состояния в 2,5 раз; однако проводимость канала при этом не меняется. Высокие концентрации АТР (>4 тМ) уменьшали активность канала благодаря конкуренции с 1Рз за места 1Р3-связывания. Аллостерическая модуляция 1Р3-индуцированного высвобождения Са2+ ATP-ой может вносить вклад в поддержание клеточной выживаемости во время периодов энергетического голода. Самая высокая активность 1Р3-канала наблюдалась при концентрации АТР в интервале 0,5-4 мМ.
5. АРАХИДОНОВАЯ КИСЛОТА И ЕЁ ВЛИЯНИЕ НА РЕГУЛЯЦИЮ
ТРАНСПОРТА Са2+.
В последнее время пристальное внимание исследователей привлекает каскад арахидоновой кислоты. Арахидоновая кислота (АА)-цисиолиненасыщенная жирная кислота (соотношение числа атомов углерода и двойных связей в молекуле 20:4)-является важным компонентом мембранных липидов. В клетке АА находится в связанном состоянии в составе глицерофосфолипидов, образуя эфирную связь с остатком глицерина обычно в sn-2 позиции (Vonkeman & Dorp, 1968) Однако, при активации многих рецепторов плазматической мембраны их соответствующими агонистами, концентрация свободной АА в цитоплазме резко возрастает (Needleman et al., 1986; Hokin, 1985). В литературе имеются данные о существовании по крайней мере 8 ферментативных путей, конечным продуктом которых является АА. Основным из них считается путь, когда АА освобождается из фосфолипидов мембран в основном при действии на них фосфолнпазы А2 или совместном действии фосфолипазы С и диацплглицероллипазы (Irvine, 1982; Needleman et al., 1986; Ozaki et al., 1989; Lapetina, 1990; Крутецкая, Лебедев, 1993).