Природные антитела, реагирующие с гистонами : Вероятная роль в патогенезе радиационных нарушений

• Автор: Абакушин, Дмитрий Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Обнинск
• Количество страниц: 104 с. : ил.

Список использованных сокращений
БСА - бычий сывороточный альбумин Гр
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ЛПС - липополисахариды
РНК - рибонуклеиновая кислота
Трис - трисгидроксиметиламинометан
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
ФИТЦ - флуоресцеинизотиоцианат
ФСБ фосфатно-солевой буфер
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Интерфазная клеточная гибель вызванная
радиацией
1.2 Природные антитела
1.3 Антигистоновые антитела
Глава И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Оборудование и принадлежности
2.2 Препараты и реактивы
2.3 Определение концентрации белка
2.4 Фракционирование комплексов гистон-иммуноглобулин
с помощью гель-фильтрации на Сефакрил
2.5 Электрофорез
2.6 Приготовление меченой тритием нативной ДНК
2.7 Определение связывания белок-ДНК
радиоиммунологическим методом (тест Фарра)
2.8 Определение антигистоновых антител методом
твёрдофазного иммуноферментного анализа
2.9 Идиотипирование препаратов иммуноглобулинов
2.10 Определение связывания иммуноглобулинов с ДНК
методом твёрдофазного иммуноферментного анализа
2.11 Определение связывания иммуноглобулинов с фосфолипидами методом твёрдофазного
иммуноферментного анализа
2.12 Действие природных антител и их комплексов с гистонами
на систему свёртываемости крови
2.13 Выделение тимоцитов, их инкубация и окрашивание
2.14 Проточная цитофлуориметрия
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Антигистоновая активность препаратов нормальных иммуноглобулинов и сывороток
крови здоровых индивидуумов
3.2 Действие ионизирующей радиации на изменение антигистоновой, анти-ДНК и антилипополисахаридной активности сывороток крови животных
3.3 Добавление гистонов к препаратам нормальных иммуноглобулинов и сывороткам крови здоровых доноров придает им новые антигенсвязывающие свойства
3.4 Выделение комплексов иммуноглобулинов с гистонами и определение их свойств
3.5 Цитотоксичность гистонов и защитная роль природных антител, реагирующих с гистонами
3.6 Влияние комплексов гистонов с природными антителами на систему свертываемости крови in vitro
Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Глава II. Материалы и методы
L-a-фосфатидилхолин тип III-B из бычьего мозга (Sigma); акриламид (LKB, Швеция);
альбумин бычий сывороточный, фракция 5 (Sigma);
бис-акриламид (Amresco, США);
гаммаглобулин бычий (Serva, Германия);
гистон III-S (Н1) из телячьего тимуса (Sigma);
гистон VIII-S (НЗ) из телячьего тимуса (Sigma);
гистон VII-S (Н2Ь) из телячьего тимуса (Sigma);
гистон VI-S (Н2а+Н4) из телячьего тимуса (Sigma);
гистон тотальный (15 кД) из телячьего тимуса (Calbiochem, США);
глицерин (Serva);
глицин (Reanal, Венгрия);
ДНК тимуса теленка (Sigma); додецилсульфат натрия (Amresco, США); желатин (Sigma);
инсулин, человеческий рекомбинантный из дрожжей (Sigma); кардиолипин (дифосфатидилглицерол) из бычьего сердца (Sigma); конъюгаты антител к lg, IgG и IgM с пероксидазой (Sevac, Чехия); краситель Hoechst 33258 (Sigma);
Кумасси бриллиантовый голубой СВВ R-250 (Serva); липополисахарид W E. coli 0111:В4 (Difco Laboratories, США); липополисахарид W S. typhimurium (Difco Laboratories); натрий додецилсульфат (Koch-Light Laboratories Ltd., США); нуклеаза SI (Boehringer-Mannheim, Германия); орто-фенилендиамин (Calbiochem); препараты нормальных человеческих гамма- или иммуноглобулинов (Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г Н. Габричевского, Россия); пропидиум иодид (Sigma);