Анализ опиатов, барбитуратов и каннабиноидов методом латексной агглютинации с использованием функциональных полимерных микросфер

• Автор: Солодухина, Надежда Михайловна
• Шифр специальности: 03.01.06, 02.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 114 с. : ил.

Оглавление
Введение
Глава 1. Литературный обзор
1.1 Актуальность проблемы наркомании
1.2. Характеристики опиатов, каннабиноидов, барбитуратов
1.3 Методы диагностики наркомании
1.3.1. Иммунохимические методы анализа наркотических веществ
1.3.2. Экспресс методы диагностики наркомании: Метод ИХА и метод на основе реакции латексной агглютинации
1.4. Использование полимерных носителей для создания
биотехнологических тест-систем
Глава 2. Экспериментальная часть
2.1. Исходные вещества и материалы
2.2 Методы синтеза и исследования
2.2.1 Синтез и получение рабочих характеристик полистирольных (пСт)
и полиметилметакрилатных (пММА)суспензий с разными диаметрами, содержащие карбоксильные группы на поверхности
2.2.2. Синтез и получение рабочих характеристик иммунологических реагентов
Глава 3. Результаты и обсуждения
3.1 Синтез и определение свойств полимерных микрочастиц

3.1.1 Синтез полистирольных микрочастиц
3.1.2 Синтез полиметилметакрилатных микрочастиц
3.2 Синтез белковых конъюгатов морфина, барбамила, Д9-ТГК
3.3 Разработка способа иммуноанализа низкомолекулярных соединений (опиатов, барбитуратов, каннабиноидов) на основе реакции латексной агглютинации
3.3.1 Оптимизация условий проведения реакции латексной агглютинации
3.3.2. Оценка аналитических параметров разработанных диагностических наборов на выявления наркотических веществ в моче методом латексной агглютинации
3.3.3. Апробация разработанных диагностических наборов реагентов
3.3.4. Определение времени хранения разработанных диагностических наборов реагентов
Выводы
Сокращения

Введение
В последние годы в нашей стране и в мире злоупотребление наркотическими веществами (НВ) приобретает все более широкие масштабы и негативно влияет на все сферы деятельности человека [1]. Начальным этапом выявления и предупреждения наркомании являются массовые обследования людей с помощью скрининговых методов анализа. К ним, в первую очередь, относятся способы, включающие различные методы иммуноанализа с инструментальной либо визуальной детекцией. Наибольшее распространение получили иммунофлуоресцентный, иммуноферментный, иммунохроматографические методы.
Большое значение имеет разработка методов экспресс диагностики для быстрого и достоверного выявления факта употребления НВ в «полевых» условиях (в отсутствие приборного оснащения).
В настоящее время для проведения экспресс анализа на выявление НВ в биологических жидкостях человека используются иммунодиагностические тест-системы, включающие применение функциональных частиц монодисперсных суспензий. Такие тест-системы позволяют получить достоверный результат, обладают высокой скоростью проведения анализа (10-15 минут), простотой интерпретации полученных результатов, низкой стоимостью исследования.
Принцип работы указанных диагностических тест-систем основан на высокоспецифичной иммунохимической реакции между антигеном и антителом, которые предварительно иммобилизовали на полимерные носители. При проведении анализа полимерные конъюгаты, содержащие антигены и антитела взаимодействуют и образуют пространственные сетки -агломераты, наличие которых в растворе может быть зарегистрировано различными методами. Например, методом спектрофотометрии, нефелометрии или простым визуальным наблюдением.

О МНЯ'
II I
— С-ОН + Я’-М=С
полимерная
микросфера
-С-О-С

О N Н Я'

поиимгрная
ынкросфера
с-о-с

+ N Н >- белок
полимерная
мжросфера
С-И Н -белок +

+ Р?1—N =С=И
Метод активации карбоксильных групп с помощью карбодиимидов прост в исполнении. К недостаткам метода можно отнести возможность внутримолекулярного сшивания биомолекул, так как молекулы белка содержат как карбоксильные, так и аминогруппы и реакция равновероятна по обеим указанным группам. Меж- и внутримолекулярное сшивание снижает иммунную активность биолиганда [90]. С помощью двухстадийного метода активации возможно устранить указанный недостаток. На первой стадии карбоксильные группы переводятся в активную, но стабильную форму,
микросферы отделяются от дисперсионной среды с оставшимися в ней
непрореагировавшими компонентами, а затем, на второй стадии, проводят ковалентное связывание с биолигандами [91].
Среди наиболее распространенных двухстадийных методов активации функциональных групп можно назвать так называемый метод
«активированных эфиров». Схема протекания процесса активации в этом случае выглядит следующим образом [92]:

полимерная н ,1М, п Л ||
г_пи х иг — 1У Чм 4. о'ы--мо пк 4. □им-л-мио