Высокоэффективная жидкостная хроматография порфиринов и косвенное спектрофотометрическое детектирование органических молекул

• Автор: Лазарева, Елена Евгеньевна
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 145 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Г лава 1. Косвенное спектрофотометрическое детектирование неэлектролитов в высокоэффективной жидкостной
хроматографии (обзор литературы)
Глава 2. Исходные вещества, аппаратура, расчетные формулы
Глава 3. Хроматографическое поведение растительных пигментов
и их производных
3.1. Нормально-фазовая ВЭЖХ
3.2. Обращенно-фазовая ВЭЖХ
3.3. Обсуждение результатов
1 лава 4. Хроматографическое поведение некоторых синтетических
порфиринов на различных сорбентах
4.1. Силасорб
4.2. Нуклеосил С18
4.3. Диасорб-130-фенил
4.4. Диасорб-130-амин
4.5. Обсуждение результатов
Глава 5. Изучение адсорбции порфиринов
5.1. Использование моделей Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского
5.2. Построение изотерм адсорбции по данным ВЭЖХ
5.3. Обсуждение результатов
Глава 6. Косвенное спектрофотометрическое детектирование
органических молекул
6.1. Косвенное детектирование некоторых фенолов и спиртов
6.2. Определение жирорастворимых витаминов Е и Б
6.3. Определение краун-эфиров
6.4. Определение некоторых углеводов

6.5. Сисктрофотометрическое изучение слабых взаимодействий
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. В настоящее время одним из направлений в развитии высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) является разработка новых детектирующих систем. Метод косвенного спектрофотометрического детектирования позволяет расширить круг веществ, определяемых методом ВЭЖХ, а в ряде случаев повысить чувствительность определения соединений, не поглощающих или имеющих низкое поглощение в ультрафиолетовой или видимой областях спектра. Однако результаты определения неэлектролитов трудно прогнозировать, поскольку не вполне ясен механизм возникновения косвенного отклика и мало исследована концентрационная зависимость площади аналитического сигнала. Поэтому актуальна разработка различных вариантов косвенного детектирования в ВЭЖХ и поиск новых модификаторов подвижных фаз, поглощающих в видимой области спектра. В соответствии с этим в настоящей работе для косвенного спектрофотометрического детектирования органических молекул (фенолы, спирты, витамины, краун-эфиры, углеводы) предлагается использовать порфирины. Порфирины удовлетворяют основным требованиям, предъявляемым к модификаторам подвижных фаз для косвенного спектрофотометрического детектирования неэлектролитов, однако ранее для этих целей не использовались.
Цель работы: изучение хроматографического поведения порфиринов в различных подвижных фазах на различных сорбентах для выбора модификаторов подвижных фаз и использование этих модификаторов для косвенного спектрофотометрического детектирования органических молекул в видимой области спектра.
Для достижения поставленной цели
- изучено влияние природы, состава подвижных фаз, природы неподвижных фаз, структурных особенностей лигандов и их комплексов с металлами на хроматографические параметры удерживания порфиринов;
- рассмотрены механизмы сорбции порфиринов и металлопорфиринов в условиях нормально- и обращенио-фазового вариантов ВЭЖХ;

Из данных табл.4 видно, что все металлокомплексы отделяются от лигандов и удерживаются меньше их. Это связано с тем, что изменение реакционного центра молекулы (ЫдЩ-М) приводит к более сильному взаимодействию ИдМ с полярными растворителями - компонентами подвижных фаз. Объемы удерживания комплексов с двухзарядным центральным ионом металла близки. По-видимому, это обусловлено тем, что образование очень прочных комплексов усредняет свойства хслатов [67]. Ниже приведены константы устойчивости некоторых комплексов в ледяной уксусной кислоте [62]:
Соединение СиФн а СиФн Ь гпФн а гпФн ь
Ку 4,(М037 4.0-1038 2,9-1033 3,3-1034
В подвижной фазе ацетон - уксусная кислота (90:10) все соединения выходят одним пиком, пики достаточно симметричные. При увеличении содержания уксусной кислоты вид. хроматограмм не изменился, хотя для ряда соединений изменились объемы удерживания, что, вероятно, обусловлено особенностями сольватации их этим растворителем. В этих подвижных фазах комплекс Се(1У)Фн выходит позже комплексов М(П)Фн.
В подвижной фазе хлороформ - уксусная кислота (95:5) соединения а- и Ь-ряда разделяются, кроме феофитината свинца, который выходит одним пиком, хотя тыл хроматограммы размыт (рис. 8). Разделение соединений а- и Ъ-ряда обусловлено изменением взаимодействий при переходе от более полярного ацетона к менее полярному хлороформу.
Отметим, что в подвижных фазах хлороформ - уксусная кислота (95:5), гексан - хлороформ - метанол (50:45:5), гексан - бутанол (96:4) комплекс Се(1У)ФН выходит раньше комплексов феофитинов с двухзарядными катионами. Вероятно, это можно объяснить тем, что в этих ПФ менее полярные растворители, по сравнению с ацетоном и уксусной кислотой, улучшают сольватацию экстралигандов (сульфат-ионов) комплекса Се(1У)Фн, что и приводит к уменьшению его объема удерживания.